干细胞冻存液
用途
用于冷冻保存对低温冷冻敏感、对DMSO敏感的细胞类型,例如:原代细胞和干细胞。不含DMSO、蛋白,不含任何动物源成分。
性状
黄色澄清水溶液,无细菌、真菌、支原体,pH=7.2~7.8。
运输和储存
2~8℃低温储存和运输,不可冻融后再使用。本品自生产日期起,一年内有效。
使用方法
准备细胞
1. 检查并确认细胞没有真菌、细菌、支原体污染。
2. 冻存前的细胞处于对数生长期最佳。
3. 计数待冻存的细胞数量。悬浮细胞应180g离心5~10min后除去培养基,贴壁细胞应消化后计数,再180g离心除去培养基以获得细胞沉淀。
细胞冻存
4. 首先确定细胞适宜的冻存密度和体积,计算应使用的LC1605冻存液体积。
注:可使用的冻存密度为2~40×106/ml,最佳密度为4~20×106/ml。冻存体积为0.25~1ml/管,推荐冻存体积为0.5ml/管。
5. 吸取适量LC1605重悬细胞,立即分装至细胞冻存管。
6. 立即将冻存管移入-80℃低温冰箱,不能采取任何程序降温措施或使用程序降温装置。如果无法立即移入-80℃低温冰箱,至少应当先移入0℃以下环境中(如-20℃冰箱)短暂存放10 min左右,同样不能采取程序降温。冻存液重悬后的细胞不能在室温或2~8℃静置超过10 min以上。
7. -80℃冰箱过夜后的冻存管,要立即移入液氮中储存,不可于-80℃长期冻存。
细胞复苏
8. 先准备室温或37℃预温的基础培养基,其体积为冻存液体积的15~30倍。
9. 取出液氮中的冻存管,置于37℃水浴并不断轻摇。待剩余1粒米大小的冰块时,迅速移出水浴。
10.立即用基础培养基稀释细胞悬液,轻柔吹打3~5次混匀。然后,180g离心5~10分钟,获得细胞沉淀备用。