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细胞名称 抗人大肠癌单抗杂交瘤细胞;CYL-1图片
形态特性 淋巴母细胞样
生长特性 半贴壁生长
特征特性 可产生抗人大肠癌的单克隆抗体。
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
传代方法 1:3传代,2-3天传一代
传代情况 C50
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR
同工酶
染色体
细胞名称 |
抗人大肠癌单抗杂交瘤细胞;CYL-1图片 |
生长特性 |
贴壁生长 |
价格 |
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主要功能:
(1) 血管平滑肌细胞的再生能力是原发血管病变的重要因素。
(2) 表达钙通道及ICAM-1和VCAM-1,参与血管壁的炎症反应。
(3) 与血管疾病的进展和稳定有关。
生理变化:
(1) 主动脉硬化。
(2) 主动脉瘤
(3) 主动脉钙化。
基本特性:
(1) 组织来源于正常大鼠大动脉组织。
(2) 鉴定:肌动蛋白,alpha-SMA和Desmin免疫荧光染色。
(3) 原代细胞培养末期液氮冻存。
(4) 每冻存管细胞数:>5×105 cells/1ml。
(5) 肌动蛋白,alpha-SMA和Desmin免疫荧光染色验证。
(6) 不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。
抗人大肠癌单抗杂交瘤细胞;CYL-1图片培养操作步骤 :
1.用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片完全浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
实验要点及说明 :
1.本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2.所使用的盖玻片应该为优质玻璃制造,并经过铬酸洗液处理;
3.盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4.如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5.如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在0.5%多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
操作流程:
1.1 主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%胰酶消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞,以0.25%胰酶消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100%,计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d,绘制细胞生长曲线
CTGF 大鼠结缔组织生长因子
MIP-1 Alpha 大鼠巨噬细胞炎性蛋白-1α
MIP-1 Gamma 大鼠巨噬细胞炎性蛋白-1γ
MIP-1 Beta 大鼠巨噬细胞炎性蛋白-1β
MIP-2 大鼠巨噬细胞炎性蛋白-2
MIP-3 Alpha 大鼠巨噬细胞炎性蛋白-3α
MIP-3 Beta 大鼠巨噬细胞炎性蛋白-3β
MIP-4 大鼠巨噬细胞炎性蛋白-4
MIP-5 大鼠巨噬细胞炎性蛋白-5
抗人大肠癌单抗杂交瘤细胞;CYL-1图片Ret MMP-9 大鼠血清金属基质蛋白酶-9
RANTES 大鼠趋化因子
E2(Ret) 大鼠雌二醇
G-CSF 大鼠粒细胞-集落刺激因子
GM-CSF 大鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子
M-CSF 大鼠巨噬细胞-集落刺激因子
LIF 大鼠白血病抑制因子
IGF-1 大鼠胰岛素样生长因子-1
IGF- II 大鼠胰岛素样生长因子-Ⅱ
ICAM- I 大鼠细胞间粘附因子-Ⅰ
VCAM-1 大鼠血管内皮细胞间粘附因子-1
L-selectin 大鼠可溶性L-选择素
E-selectin 大鼠可溶性E-选择素
P-selectin 大鼠可溶性P-选择素
PDGF-AB 大鼠血小板衍生生长因子
PKB (Rat) 大鼠蛋白激酶B
PDGF-BB 大鼠血小板衍生
规格: 96T/48T 英文名称
Rat LTC4 ELISA Kit 大鼠白三烯C4(LTC4) 规格: 96T/48T 英文名称
Rat Interleukin23 ELISA Kit 大鼠白介素23(IL-23) ELISA试剂盒 规格: 96T/48T 英文名称
Rat Interleukin23 ELISA Kit 大鼠白介素23(IL-23) ELISA试剂盒 规格: 96T/48T 英文名称
Rat Gamma-aminobutyric acid ELISA Kit 大鼠γ氨基A Kit 规格: 96T/48T 英文名称
Rat α-L-fucosidasea useful ELISA Kit 大鼠α-L-岩藻糖苷酶(AFU) 规格: 96T/48T 英文名称
Rat α-L-fucosidasea useful ELISA Kit 大鼠α-L-岩藻糖苷酶(AFU) 规格: 96T/48T 英文名称
Rat MGα1 ELISA Kit 大鼠α1微球蛋白(MGα1)盒
生长因子-BB