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Morgan  HLA-B27 SSP 检测试剂盒
一、前言
本试剂盒是美国德州生物基因有限公司（Texas BioGene Inc,简称TBG）生产的关于HLA-B27 SSP定性检测试剂盒。它属I类B27决定位点，含有1种HLA-B27抗原的引物装置，此试剂盒具有可靠、简单、容易更新等特点。

二、临床背景
强直性脊柱炎（ankylosing sporidylitis，AS；）是一种主要侵犯脊柱，并可不同程度的累及骶髂关节和周围关节的慢性进行性炎性疾病。本病又名Marie-stumpell病、Von Bechterew病、类风湿性脊柱炎、畸形性脊柱炎、类风湿中心型等，现都称AS。AS特点为腰、颈、胸段脊柱关节和韧带以及骶髂关节的炎症和骨化，髋关节常常受累，其它周围关节也可出炎症。本病一般类风湿因子阴性，故与Reiter综合征、牛皮癣关节炎、肠病性关节炎等统属血清阴性脊柱病。
通过与国际抗风湿病联盟合作调查，最近确定我国AS发病率为0.3%。男性多于女性，男女比例约4：1。男性脊柱疾患呈进行性，女性脊柱病一般较轻。AS常见于16-31岁青年人，男性多见，40岁以后首次发病者较少，约占3.3%。
虽然诊断主要依靠临床表现和X线证据，一般不单独依靠HLA-B27来诊断AS，但据流行病学调查，AS病人HLA-B27阳性率高达90-96%，而普通人群HLA-B27阳性率仅4-9%；HLA-B27阳性者AS发病率为10-20%，而普通人群发病率为2‰，相差约100倍。表明HLA-B27与AS具有明显的相关性，可作为AS诊断的重要参考指标。

三、实验原理
本试剂盒是特异性寡核苷酸聚合酶链反应（SSP）检测技术的主要应用。

四、试剂盒组成
1．96孔板（0.2ml反应管）
2．Master Buffer  1040ul

五、未提供试剂
1．Taq酶（5u/ul）                            5.琼脂糖
2．无菌双蒸水                                 6.PCR扩增仪
3．矿物油                                     7.电泳仪
4．0.5 X TBE缓冲液                            8.紫外透射分析仪

六、扩增程序
循环次数温度时间
1196℃2.0min
21096℃15s
65℃50s
32294℃10s
62℃50s
72℃30s
414℃取出
注： 试验前须提前20分钟按上表程序设计开机预热（PCR时间约1小时15分钟）

七、DNA样品准备
      1．血样收集在含EDTA或ACD 的抗凝试管中，不能使用肝素抗凝血，因肝磷脂可能抑制扩增。
2．样品A260/280比值应介于1.65~1.8之间。
3．当利用琼脂胶电泳检查时，DNA将出现一条带。它的尺寸比10kb略大。

质量数反应管数
20-120ng1
八、实验步骤
1．取Master Buffer 9 ul于一支新的0.5 ml反应管中。
2．取DNA 2 ul加入0.2 ml反应管中。
3．取已稀释过的Taq酶1ul（稀释方法：1ulTaq酶+9ulBuffer缓冲液）加入0.2ml反应管中
4．充分混匀，将其混合物12ul加入已知引物中。
5．滴入矿物油一滴，放入已预热好的PCR仪进行扩增。
6．配好2.5%的琼脂糖凝胶。
7．电压8-10V/cm（红色带位置约0.7cm-1cm）
8．本实验建议一次至少做5个测试：

容量（ul/孔）
DNA(20-120ng/ul)2.0
Master  buffer9.0
Taq酶(0.5u/ul)       1.0(已稀释)
总数12.0
即先加Buffer和Taq酶混合液10ul于管底,再加样品DNA 2ul，并小心混匀；再上PCR仪扩增。

九、结果判断
1．一条带显示于600bp处，为内部控制带（内对照），未出现其它带HLA-B27则为阴性，
2．当一条带显示于145bp处为特异性条带，内控带不明显或不显示 （这取决于不同引物装置），HLA-B27则为阳性。

十、注意事项
1．确定DNA存在
2．操作防污染
3．试剂盒应贮存在-20℃
4.  产品仅供科学研究使用！