PAT基因核酸检测试剂盒（PCR-荧光探针法）

PAT 基因核酸检测试剂盒（一管式 PCR-荧光探针法）

◆ 产品说明

转基因检测系列可针对食品、饲料等样品中转基因成分的特异核酸片段进行扩增，通过实时扩增曲

线判定结果。本产品用于 PAT 基因成分的检测，检出限为 0.1%。

◆ 产品组成（48 测试）

试剂 含量

A-PAT-P 20μL × 8 管× 6 排

NG -P 100μL × 2 支

PG-PAT-P 100μL × 1 支

◆ 适用仪器

ABI 7500、CFX 96、Mx 3005P、LineGene9600 等实时荧光 PCR 仪。

◆ 自备耗材和仪器

①冰盒；②移液器（0.5-10μL，10-100μL，100-1000μL）及配套灭菌吸头；③离心机；④涡旋混匀器；⑤金属

浴；⑥均质机、搅拌机或研钵等研磨器具；⑦电子天平。

◆ 注意事项

1．本试剂检测灵敏度高。为了防止污染，实验要分区操作。

1）第一区：样本制备区。

2）第二区：模板添加区。

3）第三区：扩增及产物分析区。

★ 分区之间最好进行物理性隔离，避免人为因素造成的污染。

2．实验过程中穿戴工作服和乳胶手套，不同区域独立使用工具，需更换手套和实验服。

3．严格按照操作步骤操作，试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。

4．反应液中的成分对光敏感，应避光保存。试剂使用前要完全解冻，但应避免反复冻融，推荐使用前离心 30

秒，并按检测频次将反应液以适当体积分管保存。

5．反应结束后，扩增管请置于密封袋内丢弃，当日清理，开盖易造成气溶胶污染，禁止开盖。

6．不同批号试剂请勿混合使用，在有效期内使用。

◆ 样品处理

参照《GB/T 19495.3-2004 转基因产品检测 核酸提取纯化方法》或其他标准处理样品，除了处于食物和（或）

饲料链起始端的农产品和粗加工材料（如粉碎的产品），大多数工业加工的食品经过了物理、化学及酶的处理。这

些处理会降低 DNA 的含量及纯度。因此，每一方法的适用性及重复性会随特异样品而异，一种特定的 DNA 提取方

法的性质特征依赖于被研究的食品种类。实验室样品的代表性应符合《GB/T 19495.7-2004 转基因产品检测 抽样和

制样方法》。制备的样本保存待用。

详细步骤请按照标准操作或查阅食安通软件。

★ 若使用非一次性研磨器研磨样品，一定要彻底清洗研磨器并充分干燥后再进行下一份样品的研磨，防止交叉污染。

◆ 实验操作

1.模板制备（样本制备区）

SM-041052MⅡ-A022

建议使用配套植物基因组 DNA 提取试剂盒，具体过程详见产品说明书。

2.添加模板（模板添加区，放置于冰盒上进行）

剪下所需测试数的已含有反应液的 PCR 管，放置在室温待解冻后，离心 30 秒后揭开封口膜，向每管反应液

中分别加入 5μL 模板，顺序为 NG、待测样品模板、PG-PAT-P。盖好配套的 PCR 管盖后，涡旋混匀 30s，离心 1min，

立即进行 PCR 扩增反应。

3.扩增反应（扩增及产物分析区）

使用荧光定量 PCR 仪，荧光基团选择 FAM，淬灭基团选择 TAMRA。

按下列条件设置扩增反应：

PCR 循环 荧光收集位点

95℃ 10 分钟 1 个循环 —

95℃ 15 秒

40 个循环

—

60℃ 1 分钟 ※

4. 基线和阈值设定

基线调整取 3-15 个循环的荧光信号，阈值线应超过阴性对照扩增曲线的最高点

◆ 结果判定

检测样品无 Ct 值或≥40，曲线为直线或轻微斜线，无“S”型扩增曲线，可报告样品阴性，不含有 PAT 基因或含

量低于检出限；

检测样品 Ct≤36，曲线呈“S”型扩增曲线，可直接报告样品阳性，含有 PAT 基因；

检测样品 36＜Ct＜40，需进行一次重复实验，若 Ct 值仍处于 36 和 40 之间且呈“S”型扩增曲线，同时各种实验

对照结果正常，报告样品阳性，否则报告样品阴性。

★NG 反应为平滑直线，PG 反应为“S”型扩增曲线，此次检测结果有效，否则无效。如重复检测结果仍为无效，请与技术支持人员联系。