以下是细胞生物学试剂详细说明:
本品是最常用的检测细胞内超氧化物阴离子水平的荧光探针。Dihydroethidium可以溶解于DMSO,配制成适当的母液。
Dihydroethidium是一种最常用的超氧化物阴离子荧光检测探针。可以直接用于活细胞的标记。Dihydroethidium被活细胞摄入后,可以在细胞内的超氧化物阴离子作用下脱氢,产生ethidium。Ethidium (例如溴化乙锭)可以和RNA或DNA结合产生红色荧光。当细胞内的超氧化物阴离子水平较高时,产生的ethidium较多,红色荧光就较强,反之则较弱。这样就可以用dihydroethidium进行超氧化物阴离子水平的检测。
Dihydroethidium本身为蓝色荧光,最大激发波长为370nm,最大发射波长为420nm,脱氢后和RNA或DNA结合产生红色荧光,最大激发波长为300nm,最大发射波长为60nm,实际观察时也可以使用535nm作为激发波长。
用于细胞内超氧化物阴离子检测时,Dihydroethidium的常用浓度为-0μM。通常用含有0.5-5μM的Dihydroethidium的适当溶液和细胞一起在37℃孵育30分钟左右进行荧光探针装载,随后可以适当洗涤,接着可以直接用流式细胞仪或其它适当荧光检测仪器进行检测。
分子式:C2H2N3
分子量:35.4
注意事项:
. Dihydroethidium易在空气中氧化,请尽量避免暴露于空气中。
2. Dihydroethidium脱氢后产生毒性较高的ethidium,请注意防护。
3. 荧光染料均存在淬灭问题,请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。
储存条件:-20℃,有效期半年。
超氧化物阴离子荧光探针DHE注意事项
. 微量试剂取用前请离心集液。
2. Annexin V-PE/7-AAD 避光保存及使用。
3. 7-AAD 为潜在致癌物,操作时请采取防护措施,穿防护服、戴手套等。
4. 本试剂盒适用于检测活细胞,流式细胞仪检测时,细胞数量不以应低于×05,,不推荐用于检测组织样本。
5. 推荐使用悬浮培养细胞。如果是贴壁细胞,建议适用不含EDTA 的胰酶消化,如消化不当,可能引起假阳性,而用细胞刮子会造成细胞粘连成团,而影响检测。可将胰酶消化后细胞的保存在含2%BSA 的PBS 中,防止进一步的损伤。
6. 细胞固定后可能导致荧光的淬灭,请不要固定样品。
7. 因检测细胞的类型、凋亡诱导剂种类、使用的检测仪器不同,因而流式检测的荧光补偿也不同,因此建议每次检测均需使用未经凋亡诱导处理的细胞作为对照,进行荧光补偿的调节。
产品特点:
.离心吸附柱内硅基质膜全部采用进口世界著名公司特制吸附膜,柱与柱之间吸附量差异极小,可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
2.使用了优质溶胶液,不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐,不抑制回收后酶切、连接克隆等下游反应。
3.独特的溶胶液/结合液配方,将溶胶和结合两种功能统一,因此一个试剂盒可以运用于琼脂糖DNA回收、PCR产物清洁纯化、酶切产物纯化回收等多种情况,节省了需购买多种试剂盒的费用,
4.溶胶液/结合液调制成为了黄颜色,便于观察溶胶效果和监测pH值变化从而达到最佳结合效果,大大提高回收效率。
5.改进的溶胶液配方,大大提高了缓冲能力和稳定性,即使样品变化很大也能将PH缓冲在最佳结合范围内。
6.快速、方便,不需要使用有毒的苯酚、氯仿等试剂,也不需要乙醇沉淀。
SporulationBroth
Elek氏培养基 用于致泻大肠埃希氏菌的产毒培养
TCH(-2-羧酸酰肼) 0. 加入改良罗氏培养基中制成TCH培养基,用于分枝杆菌鉴定
Wort琼脂基础250g/瓶麦芽汁琼脂基础,用于真菌,特别是酵母菌的计数,每培养基中添加0.235g2incubationmediaWort琼脂基础250g/瓶麦芽汁琼脂基础,用于真菌,特别是酵母菌的计数,每培养基中添加0.235g2702
标准I号营养琼脂 250g 标准细菌计数、含糖(MERCK方法)
叠氮化物葡萄糖液态培养基28340250g用于水和污水中粪性链球菌发酵法的推测试验(CJ/T00T2206.5-2009)。
YPD Broth 培养基 250g incubation media YPD Broth 培养基 250g
皂味口磨 产糖化酶 支/瓶
氧化酶试纸于O7菌氧化酶试验
Ofsolubleironpyrophosphate
ITCBrothAdditive
RVS肉汤 RVS Broth 用于食品中沙门氏菌检验选择性增菌(ISO标准)
牛胆汁粉 Bile powder of cow 00克 BR,40%
APT琼脂250g/瓶用于乳酸菌的分离培养incubationmediaAPT琼脂250g/瓶用于乳酸菌的分离培养
ElekMedium
EB病毒转化的人B淋巴细胞;KM980
卵巢上皮细胞生长添加物OEpiCGS
IL3 Others Human 人 IL3 / ALRH CHO细胞裂解液 (阳性对照)
瘤牛皮肤细胞;BIN-S 白血病单核细胞,J-细胞 5637(膀胱癌细胞)
CL-008A9(小鼠皮下结缔组织细胞)5×06cells/瓶×2
TNFSF Others Human 人 TNFSF / RANKL / CD254 人细胞裂解液 (阳性对照)
水牛皮肤成纤维样细胞;WB-S5
IFNB Others Cynomolgus 食蟹猴 IFNB / IFN-beta / Ierferon beta 人细胞裂解液 (阳性对照)
CL-097RL95-2(人子宫内膜癌细胞)5×06cells/瓶×2
Hut-78细胞,皮肤T细胞淋巴瘤 人血管平滑肌,T/G细胞 人低侵袭性脉络膜黑色素素瘤细胞;OCM-A
A9(小鼠皮下结缔组织细胞) 5×06cells/瓶×2
PVRL2 Others Human 人 CD2 / Nectin-2 / PVRL2 人细胞裂解液 (阳性对照)
超氧化物阴离子荧光探针DHE操作步骤:
、贴壁细胞的消化
①吸除培养液,用无菌 PBS、Hanks 液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
②加入少量 源叶生物 Trypsin-EDTA solution,略盖过细胞即可,室温放置 0.5~2min, 不同的细胞消化时间有所不同。
③显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变
化;或者用枪吹打细胞发现细胞刚好可以被吹打下来,吸除胰酶细胞消化液。加入含血清的 完全细胞培养液,吹打下细胞,即可直接用于后续实验。
④如果发现消化不足,则加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落, 直接用胰酶细胞培养液把细胞全部吹打下来。000~2000g 离心 min,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全培养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
2、组织的消化不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。