自备物品:
15毫升锥形离心管:用于制备样品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶标板:用于比色的容器
分光光度仪:用于比色分析
酶标仪:用于微量样品比色分析
储存条件
14℃或-20℃
特点:
1.产品仅用于科研即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板,操作简单,定量准确快速
2. 引物经过优化,特异性强。预期的 PCR 产物长度为 560 bp
3. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳
4. 提供阳性对照,便于分析试验结果
【结果分析条件设定】
u 基线(Baseline)设定:应选择该次实验指数扩增前所有样本荧光信号比较稳定的一段区域(所有样本荧光信号无较大波动),起始点(Start)应避开荧光采集起始阶段的信号波动,终止点(End)应比最早出现指数扩增的样本Ct值减少1~3个循环,建议基线设为6~15。
u 阈值(Threshold)设定:将阈值线设定在刚好超过正常阴性质控品扩增曲线的最高点。
【质控标准】
1. 阴性质控品的检测结果应为阴性,无指数扩增期,Ct=40或无Ct;
2. 阳性质控品的检测结果应为阳性,有明显的指数扩增期,Ct值应小于等于35;
3. 以上要求需在一次实验中同时满足,否则该次实验视为无效。
【结果判断】
1. 阳性:有明显的指数扩增期,且Ct<38;
2.可疑:有明显的指数扩增期,且38≤Ct<40,此时样本为可疑样本;对于可疑样本建议复核一次,若复核结果Ct<40且有指数扩增期,则判定为阳性,否则判定为阴性;
3. 阴性:无指数扩增期,Ct=40或无Ct值均判定为阴性样本。
【对检验结果的解释】
1. 实验室环境污染、试剂污染、样品交叉污染会出现假阳性结果;
2. 试剂运输、保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,可能会导致出现假阴性结果。
苍耳子染料法PCR鉴定试剂盒注意事项:
建议加样顺序是阴性质控品、待检样本、阳性质控品。4. PCR扩增(扩增区)
1) 仪器设置(以ABI Prism 7500为例)
将PCR反应管放入PCR仪内,按照对应顺序设置阴性质控品(NTC)、阳性质控品(Standard)及待检样本(Unknown)。Reporter Dye为FAM,Quencher Dye为None,参比染料(Passive Reference)为 None。
2 ) 扩增程序
40Cycles
50℃ 10min
95℃ 3min
95℃ 10sec
60℃ 1min
60℃采集荧光信号,反应体系为25 μl。
RGD三肽 Arg-Gly-Asp 25 800 μg/mL 1
S100B蛋白 Soluble protein-100B 2.5 80 pg/mL 0.1
S-腺苷甲硫氨酸 S-Adenosyl-L-methionine 3.75 120 ng/mL 0.1
Toll样受体2 Toll-like receptor 2 0.75 24 ng/mL 0.1
Toll样受体4 Toll-like receptor 4 0.75 24 ng/mL 0.1
α-平滑肌肌动蛋白 α-Smooth muscle actin 12.5 400 pg/mL 1
β2微球蛋白 β2-microglobulin 2.5 80 ng/mL 0.1
β半乳糖苷酶 β-galactosidase 1.5 48 U/mL 0.1
β-内啡肽 Beta-Endorphin 1.5 48 pg/mL 0.1
γ干扰素 Interferon γ 25 800 pg/mL 1
γ-谷氨酰转肽酶 γ-glutamyl transpeptidase 2.5 80 U/L 0.1
白介素2受体 Interleukin-2 receptor 50 1600 pg/mL 10
白三烯B4 Leukotriene B4 6.25 200 pg/mL 1
白细胞介素1 Interleukin 1 10 320 pg/mL 1
白细胞介素10 Interleukin 10 25 800 pg/mL 1
白细胞介素17 Interleukin 17 1.5 48 pg/mL 0.1
白细胞介素18 Interleukin 18 5 160 pg/mL 1
5'-胞苷酸 63-37-6
Cytidylic acid分子式:C9H14N3O8P分子量:323.2
5’-胞(嘧啶核)苷酸 胞苷-5’-单磷酸一水物 胞苷酸 5'-胞(嘧啶核)苷酸 胞苷-5′磷酸 胞苷-5'-单磷酸一水物
5'-胞苷酸 63-37-6
Cytidylic acid分子式:C9H14N3O8P分子量:323.2
5’-胞(嘧啶核)苷酸 胞苷-5’-单磷酸一水物 胞苷酸 5'-胞(嘧啶核)苷酸 胞苷-5′磷酸 胞苷-5'-单磷酸一水物
腺苷环磷酸酯 60-92-4
Cyclic AMP分子式:C10H12N5O6P分子量:329.21
腺苷-3',5'-环磷酸 环磷腺苷 环磷酸腺苷 腺甙环磷酸酯 腺苷环磷酸酯 环化腺苷酸
苍耳子染料法PCR鉴定试剂盒Cyclic AMP分子式:C10H12N5O6P分子量:329.21
腺苷环磷酸酯 60-92-4
腺苷-3',5'-环磷酸 环磷腺苷 环磷酸腺苷 腺甙环磷酸酯 腺苷环磷酸酯 环化腺苷酸
腺苷环磷酸酯 60-92-4
Cyclic AMP分子式:C10H12N5O6P分子量:329.21
腺苷-3',5'-环磷酸 环磷腺苷 环磷酸腺苷 腺甙环磷酸酯 腺苷环磷酸酯 环化腺苷酸
腺苷-5′-三磷酸二钠盐 34369-07-8
5'-ATP-Na2分子式:C10H14N5O13P3.2NA.H2O分子量:569.159
技术特点:
1准确可靠,临床双盲对照试验>1000例,结果与金标准测序法比对,结果一致性大于99%。
2高灵敏:可检测低至10ng的人基因组DNA。
3快速:整个检测流程只需3小时。
4简便:试剂盒提供预混好的试剂,使体系配置操作简便。
5防污染
6高特异性:双重特异性组成,保证检测结果的特异性和准确性引物与DNA互补链结合必需完全配对,才能延伸。探针特异性与所检测基因的PCR产物配对,在延伸中产生荧光。