技术特点:
1准确可靠,临床双盲对照试验>1000例,结果与金标准测序法比对,结果一致性大于99%。
2高灵敏:可检测低至10ng的人基因组DNA。
3快速:整个检测流程只需3小时。
4简便:试剂盒提供预混好的试剂,使体系配置操作简便。
5防污染
6高特异性:双重特异性组成,保证检测结果的特异性和准确性引物与DNA互补链结合必需完全配对,才能延伸。探针特异性与所检测基因的PCR产物配对,在延伸中产生荧光。
自备物品:
15毫升锥形离心管:用于制备样品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶标板:用于比色的容器
分光光度仪:用于比色分析
酶标仪:用于微量样品比色分析
储存条件
14℃或-20℃
特点:
1.产品仅用于科研即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板,操作简单,定量准确快速
2. 引物经过优化,特异性强。预期的 PCR 产物长度为 560 bp
3. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳
4. 提供阳性对照,便于分析试验结果
【结果分析条件设定】
u 基线(Baseline)设定:应选择该次实验指数扩增前所有样本荧光信号比较稳定的一段区域(所有样本荧光信号无较大波动),起始点(Start)应避开荧光采集起始阶段的信号波动,终止点(End)应比最早出现指数扩增的样本Ct值减少1~3个循环,建议基线设为6~15。
u 阈值(Threshold)设定:将阈值线设定在刚好超过正常阴性质控品扩增曲线的最高点。
【质控标准】
1. 阴性质控品的检测结果应为阴性,无指数扩增期,Ct=40或无Ct;
2. 阳性质控品的检测结果应为阳性,有明显的指数扩增期,Ct值应小于等于35;
3. 以上要求需在一次实验中同时满足,否则该次实验视为无效。
【结果判断】
1. 阳性:有明显的指数扩增期,且Ct<38;
2.可疑:有明显的指数扩增期,且38≤Ct<40,此时样本为可疑样本;对于可疑样本建议复核一次,若复核结果Ct<40且有指数扩增期,则判定为阳性,否则判定为阴性;
3. 阴性:无指数扩增期,Ct=40或无Ct值均判定为阴性样本。
【对检验结果的解释】
1. 实验室环境污染、试剂污染、样品交叉污染会出现假阳性结果;
2. 试剂运输、保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,可能会导致出现假阴性结果。
白前探针法PCR鉴定试剂盒注意事项:
建议加样顺序是阴性质控品、待检样本、阳性质控品。4. PCR扩增(扩增区)
1) 仪器设置(以ABI Prism 7500为例)
将PCR反应管放入PCR仪内,按照对应顺序设置阴性质控品(NTC)、阳性质控品(Standard)及待检样本(Unknown)。Reporter Dye为FAM,Quencher Dye为None,参比染料(Passive Reference)为 None。
2 ) 扩增程序
40Cycles
50℃ 10min
95℃ 3min
95℃ 10sec
60℃ 1min
60℃采集荧光信号,反应体系为25 μl。
透明质酸合酶3 Hyaluronan Synthase 3 31.25 1000 pg/ml 1
低糖基化IgA UdgIgA 0.625 20 ng/ml 0.1
透明质酸合酶1 Hyaluronan Synthase 1 4.375 140 mIU/ml 0.1
透明质酸合酶3 Hyaluronan Synthase 3 3.125 100 mIU/ml 0.1
沙眼衣原体抗原 chlamydia trachomatis 0 10
多巴胺 dopamine 12.5 400 pg/ml 1
ER脂筏相关蛋白2 ER Lipid Raft Associated Protein 2 12.5 400 pg/ml 1
25羟基维生素D3 25-hydroxy vitamin D3 2.5 80 μg/L 0.1
吻素 Kisspeptin 25 800 pg/ml 1
线粒体呼吸链复合物I mitochondrial respiratory Complex I 7.5 240 U/mL 1
幽门螺杆菌空泡毒素IgG Helicobacter pylori Vacuolating cytotoxin IgG 6.25 200 ng/ml 1
透明质酸合酶2 Hyaluronan Synthase 2 31.25 1000 pg/ml 1
胞内氯离子通道蛋白4 chloride intracellular channel protein 4 31.25 1000 pg/ml 1
Ⅳ型前胶原 ⅣPC 2 64 ng/ml 0.1
骨髓基质细胞抗原2 bonemarrowstromalantigen2 0.3125 10 ng/ml 0.1
靶向核糖核酸酶 targeted ribonuclease 6.25 200 IU/ml 1
脱氧核糖核酸酶Ⅰ deoxyribonuclease 3.125 100 IU/ml 0.1
1,1-二氧代-1,2-苯并异噻唑-3(2H)-酮,钠盐 糖精钠水合物 可溶性糖精钠 邻苯甲酰磺酰胺备注:A288
邻苯甲酰磺酰胺钠 128-44-9
Saccharin sodium分子式:C7H5NNAO3S分子量:206.17
1,1-二氧代-1,2-苯并异噻唑-3(2H)-酮,钠盐 糖精钠水合物 可溶性糖精钠 邻苯甲酰磺酰胺备注:A288
利谷隆 330-55-2
Linuron分子式:C9H10CLN2O2分子量:249.09
N-(3,4-二氯苯基)-N'-甲氧基-N'-甲基脲,直西龙备注:A02
双去甲氧基姜黄素 24939-16-0
Bis(4-hydroxycinnamoyl)methane分子式:C19H16O4分子量:308.33
双去甲氧基姜黄素 24939-16-0
备注:A02 AA
白前探针法PCR鉴定试剂盒Bis(4-hydroxycinnamoyl)methane分子式:C19H16O4分子量:308.33
备注:A02 AA
虾青素 472-61-7
Astaxanthin分子式:C40H52O4分子量:596.84
(3S,3’S)-3,3’-二羟基-β,β-胡萝卜素-4,4’-二酮 3,3'-二羟基-beta,beta-胡萝卜素-4,4'-二酮 3,3'-二羟基-4,4'-二酮基-Β,Β'-胡萝卜素醇备注:SB01
虾青素 472-61-7