自备物品:
15毫升锥形离心管:用于制备样品的容器
比色皿:用于比色的容器
96孔酶标板:用于比色的容器
分光光度仪:用于比色分析
酶标仪:用于微量样品比色分析
储存条件
14℃或-20℃
特点:
1.产品仅用于科研即开即用,用户只需要提供样品 DNA 模板,操作简单,定量准确快速
2. 引物经过优化,特异性强。预期的 PCR 产物长度为 560 bp
3. PCR mix 中含上样染料,PCR 后可以直接上样电泳
4. 提供阳性对照,便于分析试验结果
【结果分析条件设定】
u 基线(Baseline)设定:应选择该次实验指数扩增前所有样本荧光信号比较稳定的一段区域(所有样本荧光信号无较大波动),起始点(Start)应避开荧光采集起始阶段的信号波动,终止点(End)应比最早出现指数扩增的样本Ct值减少1~3个循环,建议基线设为6~15。
u 阈值(Threshold)设定:将阈值线设定在刚好超过正常阴性质控品扩增曲线的最高点。
【质控标准】
1. 阴性质控品的检测结果应为阴性,无指数扩增期,Ct=40或无Ct;
2. 阳性质控品的检测结果应为阳性,有明显的指数扩增期,Ct值应小于等于35;
3. 以上要求需在一次实验中同时满足,否则该次实验视为无效。
【结果判断】
1. 阳性:有明显的指数扩增期,且Ct<38;
2.可疑:有明显的指数扩增期,且38≤Ct<40,此时样本为可疑样本;对于可疑样本建议复核一次,若复核结果Ct<40且有指数扩增期,则判定为阳性,否则判定为阴性;
3. 阴性:无指数扩增期,Ct=40或无Ct值均判定为阴性样本。
【对检验结果的解释】
1. 实验室环境污染、试剂污染、样品交叉污染会出现假阳性结果;
2. 试剂运输、保存不当或试剂配制不准确引起的试剂检测效能下降,可能会导致出现假阴性结果。
补骨脂探针法PCR鉴定试剂盒注意事项:
建议加样顺序是阴性质控品、待检样本、阳性质控品。4. PCR扩增(扩增区)
1) 仪器设置(以ABI Prism 7500为例)
将PCR反应管放入PCR仪内,按照对应顺序设置阴性质控品(NTC)、阳性质控品(Standard)及待检样本(Unknown)。Reporter Dye为FAM,Quencher Dye为None,参比染料(Passive Reference)为 None。
2 ) 扩增程序
40Cycles
50℃ 10min
95℃ 3min
95℃ 10sec
60℃ 1min
60℃采集荧光信号,反应体系为25 μl。
羟赖氨酸吡啶啉 hydroxyl lysine pyridine moiety 0.625 20 ng/ml 0.1
血氨 serum ammonia 2 64 umol/L 0.1
血氨 serum ammonia 6.25 200 umol/L 1
抗RNA聚合酶Ⅲ抗体 RNAPⅢ 1 32 nmol/L 0.1
基质金属蛋白酶12 matrix metalloproteinase 12 25 800 pg/ml 1
胰凝乳蛋白酶 Chymotrypsin 2 64 mU/ml 0.1
白细胞介素8 Interleukin8 25 800 pg/ml 1
乙型肝炎病毒前S1抗原 HBV preS1Ag 0.25 8 ng/ml 0.1
乙型肝炎病毒前S2抗原 HBV preS2Ag 0.5 16 ng/ml 0.1
半胱氨酰白三烯1型受体 CYSLT 1 0.625 20 ng/ml 0.1
N-甲基-D-天冬氨酸 N-methyl- D-aspartate 0.3125 10 ng/ml 0.1
肽基脯氨酸异构酶酶FKBP25 FKBP25 0.625 20 ng/ml 0.1
无翅型MMTV整合位点家族成员4 Wingless Type MMTV Integration Site Family, Member 4 75 2400 pg/ml 10
白细胞介素36 Interleukin 36 31.25 1000 pg/ml 1
胶原蛋白 Collagen 3.125 100 ng/ml 0.1
胶原蛋白α1(Ⅰ)型 Collagen Ⅰα1 0.625 20 ng/ml 0.1
胶原蛋白α2(Ⅰ)型 Collagen Ⅰα2 0.5 16 ng/ml 0.1
己酸二乙氨基乙醇酯(MGK 264) 113-48-4
MGK 264分子式:C17H25NO2分子量:275.39
增效胺,增效灵,2-(2-乙基己基)-3A,4,7,7A-四氢-1,3(2H)-二酮备注:
己酸二乙氨基乙醇酯(MGK 264) 113-48-4
MGK 264分子式:C17H25NO2分子量:275.39
增效胺,增效灵,2-(2-乙基己基)-3A,4,7,7A-四氢-1,3(2H)-二酮备注:
补骨脂探针法PCR鉴定试剂盒己酸二乙氨基乙醇酯(MGK 264) 113-48-4
MGK 264分子式:C17H25NO2分子量:275.39
增效胺,增效灵,2-(2-乙基己基)-3A,4,7,7A-四氢-1,3(2H)-二酮备注:
MGK 264分子式:C17H25NO2分子量:275.39
己酸二乙氨基乙醇酯(MGK 264) 113-48-4
增效胺,增效灵,2-(2-乙基己基)-3A,4,7,7A-四氢-1,3(2H)-二酮备注:
增甘膦 2439-99-8
Glyphosine分子式:C4H11NO8P2分子量:263.08
催熟磷,N,N-双(膦羟甲基)甘氨酸
烯炔菊酯 54406-48-3
Empenthrin分子式:C18H26O2分子量:274.40
技术特点:
1准确可靠,临床双盲对照试验>1000例,结果与金标准测序法比对,结果一致性大于99%。
2高灵敏:可检测低至10ng的人基因组DNA。
3快速:整个检测流程只需3小时。
4简便:试剂盒提供预混好的试剂,使体系配置操作简便。
5防污染
6高特异性:双重特异性组成,保证检测结果的特异性和准确性引物与DNA互补链结合必需完全配对,才能延伸。探针特异性与所检测基因的PCR产物配对,在延伸中产生荧光。