BIO-RAD伯乐QX200数字PCR仪性能描述：最准确、最灵敏的数字 PCR 解决方案，具有广泛的应用；灵活的数字 PCR 化学方法，已针对 TaqMan 水解探针和 EvaGreen 测定进行优化；灵活的测定设置，可通过扩展实现高度的灵敏性或较大的通量；简便而易用的工作流程，通量达 96 个样品；QX200 Droplet Digital 技术的微滴划分功能可减；扩增效率和 PCR 抑制剂的影响；便捷的测定设计，不需要标准曲线

伯乐QX200微滴式数字PCR仪主要用途：癌症生物标志研究和拷贝数变异分析 ；病原体检测 ；新一代测序 ；基因表达分析，冠状病毒分析

原厂标准配置：1864002+1864003+1814000+1864007+1814040+12001925

伯乐QX200 Droplet Digital PCR系统（货号1864001）的优点
最准确、最灵敏的数字 PCR 解决方案，具有广泛的应用
灵活的数字 PCR 化学方法，已针对 TaqMan 水解探针和 EvaGreen 测定进行优化
灵活的测定设置，可通过扩展实现高度的灵敏性或较大的通量
简便而易用的工作流程，通量达 96 个样品
QX200 Droplet Digital 技术的微滴划分功能可减少扩增效率和 PCR 抑制剂的影响
便捷的测定设计，不需要标准曲线

    Bio-Rad微滴式数字PCR技术（ddPCR）是第三代PCR技术，无需标准参照物质即可给出样本的拷贝数浓度而非Ct值，其检测结果为判读提供量化的依据。根据LOB(limit of blank)和未知样本的定量结果作出判读，可避免人为错误，缩小灰区，提高检出率。 ddPCR独有的微滴处理技术，使其对PCR扩增效率的变化不再敏感，不惧含有PCR抑制物样本的挑战。随着疫情的变化以及流行病学调研的推进，更多类型的检测乃至环境监测也可能需要进行，ddPCR的这一优势会发挥作用。此外，如果新型冠状病毒发生变异，病毒基因序列上引物、探针靶向位置出现SNV，ddPCR亦能克服引物、探针结合能力下降带来的扩增效率变化，确保稳定检出。不仅如此，还能根据样本微滴荧光信号的变化，发现引物探针靶标区域可能出现变异的病例，为NGS测序分析病毒变异提供样本，助力流行病学研究。

QX200 Droplet Digital PCR 系统的应用领域
癌症生物标志研究和拷贝数变异分析 
以卓越的灵敏度和解析能力测量癌症突变的变异程度、检测稀有的 DNA 靶拷贝以及解析拷贝数变异状态。

病原体检测 
采用极为精确的 QX200 系统对靶 DNA 或 RNA 分子中的细微变化进行定量分析，从而检测和监测病原体。

新一代测序 
无需使用标准曲线，直接对 NGS 库执行绝对定量分析。

基因表达分析 
对少量 mRNA 和 miRNA 的细微变化进行可靠和可重复的检测。

环境监测 
使用 QX200 系统可测试多种环境样品，例如土壤和水。

食品检测 
采用经过验证的 ddPCR 方法对转基因生物体 (GMO) 进行评估。
Droplet Digital PCR 技术和工作流程
QX200 Droplet Digital PCR 系统由两个仪器（QX200 微滴生成仪和 QX200 微滴分析仪）及其相关的消耗品构成。
QX200 液滴生成仪用于将 PCR 反应生成 20,000 个纳升大小的液滴。在使用热循环仪进行 PCR 后，QX200 微滴分析仪将逐个分析每个样品中的液滴。微滴被吸入后，管路将分解乳化的液滴，并使它们依次通过一个双色光学检测系统。每次运行最多可处理 96 个样品。系统将计算阳性和阴性微滴的数量，从而以数字格式对靶 DNA 进行绝对定量分析。此外，对于经过 PCR 的液滴，还可以提取扩增的产品以用于下游环节，例如测序或克隆。

其他仪器
QX200 Droplet Digital PCR 系统需要使用配备 96 深孔反应模块的 C1000 Touch 热循环仪和 PX1 PCR 热封仪。
必备附件:
DG8 微滴发生卡
DG8 密封垫
发生卡底座
QX200 微滴发生油（用于 EvaGreen 测定）
微滴发生油（用于探针）
微滴分析油
ddPCR 试剂（用于基于 EvaGreen 或 TaqMan 水解探针的领域）
QX200 ddPCR EvaGreen 预混液
ddPCR 预混液（用于探针）
Droplet PCR 预混液
一步法 RT-ddPCR 试剂盒（用于探针） 

BIO-RAD数字PCR仪（QX200）技术指标

起始样品大小，µl	20
QX200 微滴生成仪容量	1–8 个样品
每 20 µl 样品的微滴数	1–96 个样品
样品光源	发光二极管
样品检测	多像素光子计数器
检测通道	FAM (EvaGreen)、HEX (VIC)
线性动态范围	5 数量级
精度	±10%
每个 96 孔板的液滴数，百万	~1.5
QX200 微滴生成仪尺寸（宽 x 深 x 高）	28 x 36 x 13 cm (11 x 14 x 5")
QX200 微滴分析仪尺寸（宽 x 深 x 高）	66 x 52 x 29 cm (26 x 20 x 11")

内容简述：
自2012年首次检测到中东呼吸系统综合症冠状病毒（MERS-CoV）以来，核酸扩增技术（NAT）一直是用于快速检测MERS-CoV的最常用的技术。开发稳定、安全的阳性标准品以评估核酸扩增检测的可靠性，并在不同的实验室中执行外部质量评估（EQA）有重要的意义。在这项研究中，MERS-CoV RNA片段包括upE，ORF1b和N被包装在人类免疫缺陷病毒1型（HIV-1）颗粒中。利用ddPCR方法，发现冻干的病毒样颗粒（VLP）核酸在37°C或更低温度下稳定，不仅可以安全地用作PCR检测MERS-CoV的对照材料，而且还可以用作EQA的参考材料。在中国宁波国际旅行医疗中心组织的一次EQA中，有49家参与机构在使用各种商业诊断试剂盒和不同提取方法检测MERS-CoV时，虽然有相对一致的结果，但同一样品在不同实验室报告的Ct值不同，这意味着需要对实验室之间的RNA提取方法和/或PCR检测条件进行标准化。
结论：
QX200可用于阳性标准品的标定，且可获得比qPCR更一致的结果。在实际工作中，可以解决没有阳性对照的情况下的检测结果准确性问题。
借鉴意义：

ddPCR可以不依赖于标准品实现绝对定量，结果可靠，还可以用于不同试剂盒之间的性能比较、验证。对追踪到的密切接触者并接受医学观察的疑似人员进行早期筛查时，可考虑使用ddPCR进行核酸检测，早发现早隔离、早治疗防扩散。