小鼠脂肪前体细胞的传代方法与操作步骤！
 
基本信息
平台编号：bio-51509
拉丁属名：3T3-L1
昆明细胞库编号：KCB92010YJ                   
细胞株名称：3T3-L1 ，小鼠脂肪前体细胞
种属：swiss小鼠
组织来源：胚胎
生长特性：贴壁生长
形态特征：成纤维样细胞
染色体：染色体众数为68-72。
支原体和其它微生物：(-)
细胞特征：L1是3T3的克隆亚株。细胞聚集并达到接触抑制的增值过程中，会发生前体脂肪细胞向脂肪细胞的转变。培养液中，高血清含量可以促进脂肪滴堆积。
传代：推荐接种密度为 2~3×103 cells/cm2，达70~80%汇合时传代，2~3天换液1次     
特性：3T3-L1是从3T3细胞（Swiss albino）中经克隆分离得到的连续传代的亚系。该细胞从快速分裂到汇合和接触性抑制状态经历了前脂肪细胞到脂肪样细胞的转变。该细胞鼠痘病毒阴性；可产生甘油三酯，高浓度血清可增强细胞内脂肪堆积。    
纯度：92％     
活力：88％（Viability by Trypan Blue Exclusion）     
检测：细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。   
储存：液氮。
 
培养条件：
完全培养基：90%DMEM（高糖，2mM L-glutamine）+10%新生牛血清
ATCC推荐此细胞最好用新生牛血清(质量要好)。如果发现细胞状态不好时，可换胎牛血清调整。
培养温度：37℃， CO2：5%
 
传代方法：
收到细胞后，在倒置显微镜下观察整个细胞生长情况：
如果细胞未长满，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超菌台内，严格无菌操作，打开细胞培养瓶，吸出培养液，换 10ml新鲜培养液后继续培养。
如果细胞已长满（达80-90%），即可进行传代培养。
 
具体步骤如下：
1、弃去培养液，用不含钙、镁离子的PBS洗1-2次。
2、加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，倒转放于37℃培养箱1-3分钟预热，然后将培养瓶翻过来让胰酶与细胞面接触大约10-30秒后，在倒置显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量完全培养基终止消化。
3、按6-8ml/瓶补加完全培养基，轻轻打匀后吸出一半，分到新的培养瓶中。如果没有特别说明，收到细胞后的第一次传代一般是一传二。
 
注：1、观察细胞最好在低倍镜（4或5X物镜)下进行，否则不能准确判断细胞的传代密度。
2、瓶中运输培养基不能重复再用,请换用加双抗的新培养基，细胞冻存后,培养基中可不加任何抗生素。
3、有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心吹打后接种到新瓶内。
4、收到细胞后，若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染，请及时与我们联系。
 
注意事项：
冻存方法：冻存液：90%完全培养液，10%DMSO。现用现配。
运输：干冰运输（1 Vial）或活细胞运输（T-25 flasks）     
用途：只可用于科研，不可用于临床诊断和治疗。
 
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