Tek-Cre
品系名称:B6/JGpt-H11emCin(Tek-Cre)/Gpt
品系类型:Knock-in
品系编号:T003764
背景:C57BL/6JGpt
品系描述
集萃药康采用基因编辑技术制作了鼠源Tek启动子和enhancer驱动的组织特异性表达Cre蛋白的B6-Tek-Cre小鼠模型,该模型可作为内皮细胞特异性诱导LoxP重组的Cre工具鼠。例如删除FLOX区域,即将该工具鼠与得到的条件性敲除模型小鼠配繁,可组织特异性删除两个LoxP之间的基因片段。已有的类似品系表达检测显示Cre重组酶活性致使内皮细胞、雌性生殖细胞和造血细胞中被LoxP位点锚定的靶基因片段删除,遗传特性表明,雄性生殖细胞内也会发生低频率的靶片段删除[1]。
通过基因编辑技术定点整合至H11位点,而H11位点作为KI的插入位点具有显著的优势:1.转入的基因定点整合至染色体,故传代稳定,不会出现因传代导致表达丢失的现象;2.能避免基因组上毗邻序列的干扰效应;3. 外源基因插入到这个位置不会破坏任何内源性基因,并且小鼠生长发育正常、不影响小鼠表型及功能[2]。
应用领域
1.内皮细胞特异性诱导LoxP重组的Cre工具鼠
验证数据
1.Cre特异性表达检测
检测方法:使用Tek-Cre鼠配繁rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP小鼠。rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP小鼠表达红色荧光,当与表达Cre重组酶的小鼠交配,后代在表达Cre的细胞中红色荧光缺失,表达绿色荧光。通过冰冻切片观察,可观察到绿色荧光表达情况,从而确认Cre蛋白在小鼠各组织的表达情况。
观察结果:观察组织冰冻切片,可见rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP与Tek-Cre交配后代小鼠,肺、心、子宫、脾、骨骼肌、脑中tdTomato等原件被切除,可表达绿色荧光EGFP,其他不能表达Cre的细胞仍表达红色荧光。
肺:
心:
子宫:
脾:
骨骼肌:
脑:
备注:Cre-为rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP小鼠简写;Cre+为rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP与Tek-Cre交配后代小鼠简写。上图Cre-与Cre+ 小鼠均为18.0周雌鼠,200倍镜下荧光图片(Scale bar 50um)。
图1 B6-Tek-Cre小鼠Cre蛋白在肺、心、子宫、脾、骨骼肌、脑的表达检测。Cre能够在这些检测的组织中表达,能够观察到绿色荧光。
2.非特异性表达检测
观察结果:观察其他主要器官组织冰冻切片,可见rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP与Tek-cre交配后代,脊髓、肠、胰腺、肝、肾细胞中tdTomato等原件不被切除,不表达绿色荧光,仍表达红色荧光。
脊髓:
肠:
胰腺:
肝:
肾:
图2 B6-Tek-Cre小鼠Cre蛋白在脊髓、肠、胰腺、肝、肾的表达检测。Cre在这些检测的组织中不表达,观察不到绿色荧光。
备注:Cre-为rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP小鼠简写;Cre+为rosa26-loxP-tdtomato-loxP-GFP与Tek-Cre交配后代小鼠简写。上图Cre-与Cre+ 小鼠均为18.0周雌鼠,200倍镜下荧光图片(Scale bar 50um)。
参考文献
1.Schlaeger, Thorsten M., et al. “Uniform vascular-endothelial-cell-specific gene expression in both embryonic and adult transgenic mice.” Proceedings of the National Academy of Sciences7 (1997): 3058-3063.
2.Hippenmeyer, Simon, et al. “Genetic mosaic dissection of Lis1 and Ndel1 in neuronal migration.” Neuron4 (2010): 695-709.
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