产品名称：GsmartI T4 DNA Ligase

货号：GWC300

浓度：5 Weiss Unit

有效期：24个月

保存条件：-20℃

产品内容：

产品简介

GsmartI T4 DNA Ligase催化双螺旋DNA或RNA的3’端羟基和5’端磷酸基形成磷酸二酯键。该酶修复双链DNA、RNA和DNA/RNA杂合体中的单链缺口。连接粘性或平末端DNA片段，GsmartI T4 DNA Ligase需要ATP作为辅助因子。

应用

• 用于限制性内切酶酶切的DNA片段的克隆；
• PCR产物的克隆；
• 连接双链寡核苷酸接头到DNA上；
• 定点突变；
• 扩增AFLP；
• 连接酶介导的RNA检测；
• 双螺旋DNA、RNA或DNA:RNA杂合体的缺口修复；
• 线性化的DNA自连；

活性单位定义：

1个黏性末端连接单位（CEU）：在16℃、30min内50%连接HindⅢ酶切的lambda DNA产物所需要的酶量。

CEU和Weiss Unit 存在下列转化关系：1 Weiss Unit = 200 CEU

储存液

20 mM Tris-HCl (pH 7.5),50 mM KCl, 1 mM DTT, 0.1 mM EDTA and 50% (v/v) glycerol

2×T4 Quick Buffer

80 mM Tris-HCl, 20 mM MgCl2, 20 mM DTT, 1 mM ATP (pH 7.8 at 25℃).

抑制或失活条件：

• 当NaCl或KCl的浓度大于200mM时强烈抑制GsmartI T4 DNA Ligase的活性。
• 65℃10min或70℃ 5min可以使GsmartI T4 DNA Ligase失活

DNA与载体连接：

一、粘性末端连接：

1. 反应体系

2. 22℃孵育30min

3. 50ul化转感受态用5ul连接产物，50ul电转感受态用1-2ul连接产物

二、平末端连接：

1. 反应体系

2. 22℃孵育30min

3. 取5ul连接产物到50ul化转感受态；电转前纯化DNA，用纯化试剂盒或酚氯仿抽提，取1-2ul到50ul电转感受态.

注：如果连接产物用于电转，用柱纯化或酚氯仿抽提纯化DNA，代替热失活GsmartI T4 DNA Ligase.

以下方法可以提高电转效率：

• 70℃ 5min或65℃10min加热失活GsmartI T4 DNA Ligase
• 纯化DNA：用商业化试剂盒或酚氯仿抽提
• 延长反应时间
• 20ul反应体系中如果使用超过2 Weiss Unit的GsmartI T4 DNA Ligase，电转前需要纯化DNA（过柱或酚氯仿抽提）