ReadiLink™xtra快速抗体标记试剂是AAT 研发，由百萤代理销售的AF594标记的抗体标记试剂盒。ReadiLink™xtra快速抗体标记试剂盒基本上只需要2个简单的混合步骤，而无需纯化。ReadiLink™试剂盒中使用的预活化AF594非常稳定，对抗体表现出良好的反应性和选择性。该试剂盒具有用于标记〜2x50 ug抗体的所有基本成分。试剂盒中提供的两个预活化AF594染料小瓶中的每一个均经过优化，可标记约50 µg抗体。ReadiLink™xtra AF594快速抗体标记试剂盒提供了一种方便而强大的方法，可以使用红色的AF594荧光团标记单克隆和多克隆抗体。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的抗体标记试剂盒。

实验方案

工作溶液配制

为了标记50 µg蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1 mg / mL），请将5 µL（反应总体积的10％）反应缓冲液（组分B）与50 µL目标蛋白质溶液混合。
注意：如果蛋白质浓度不同，请相应地调整蛋白质体积，以使〜50 µg蛋白质可用于标记反应。
注意：要标记100 µg蛋白质（假设目标蛋白质浓度为1 mg / mL），请将10 µL（反应总体积的10％）反应缓冲液（组分B）与100 µL目标蛋白质溶液混合。
注意：蛋白质应溶于1X磷酸盐缓冲盐水（PBS），pH 7.2-7.4；如果蛋白质溶解在甘氨酸缓冲液中，则必须针对1X PBS（pH 7.2-7.4）进行透析，或使用10 kDa的Amicon Ultra-0.5，Ultracel-10膜去除游离的胺或铵盐（例如硫酸铵和乙酸铵）被广泛用于蛋白质沉淀。
注意：为获得最佳标记效率，建议最终蛋白质浓度范围为1-2 mg / mL，结合效率明显降低，低于1 mg / mL。 

操作步骤

1. 将蛋白质工作溶液（溶液A）添加到一个小瓶的标记染料（组分A）中，并通过将小瓶涡旋几秒钟将它们充分混合。
   注意：如果要标记100 µg的蛋白质，请使用两个小瓶（组分A），将100 µg的蛋白质分成2 x 50 µg的蛋白质，并使每个50 µg的蛋白质与一小瓶的标记染料反应。然后合并两个小瓶，用于下一步。
2. 将缀合反应混合物在室温下放置30-60分钟。
   注意：如果需要，可以旋转或摇动缀合反应混合物更长的时间。 

1. 将5 µL（对于50 µg蛋白质）或10 µL（对于100 µg蛋白质）添加到缀合反应混合物中，占TQ™染色猝灭缓冲液（组分C）总反应体积的10％；混合均匀。
2. 在室温下孵育10分钟。标记的蛋白（抗体）可以使用了。 

蛋白质缀合物应在载体蛋白（例如0.1％牛血清白蛋白）存在下以> 0.5 mg / mL的浓度存储。为了更长的存储时间，可以将蛋白质缀合物冻干或分成单份使用，并存储在≤–20°C下。

图示

图1. HeLa细胞中微管蛋白的免疫荧光染色。HeLa细胞用4％PFA固定，用0.1％Triton X-100透化并封闭。然后将细胞与小鼠抗微管蛋白抗体一起孵育，并用ReadiLink™xtra Rapid AF594抗体标记试剂盒（#1982）标记的山羊抗小鼠IgG染色。

 

参考文献

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