特别提示:包括3173 DNA聚合酶在内,本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称:3173 DNA聚合酶
英文名称:3173 DNA Polymerase
产品货号:MT3173
产品规格:250U|2500U
3173 DNA聚合酶为来源于病毒的热稳定型DNA聚合酶,通过点突变修饰,使其3’-5’外切活性缺失(exo-形式)而获得更佳的扩增活性。该酶除了具有依赖于DNA的聚合酶活性,还具有依赖于RNA的逆转录活性,因此可用于单管RT-PCR扩增。该酶具有强烈的链置换活性,可用于DNA或RNA的等温扩增。在以RNA为模板的LAMP实验中,可实现单酶系统反应。对于有复杂二级结构的RNA模板,可通过92℃加热3s来得到好的扩增效果,而Bst pol在此温度加热后导致扩增活性丧失。
3173 DNA聚合酶在95℃条件下的半衰期为20min,因此PCR的起始预变性时间通常为1~2min。该酶搭配两种Buffer:10×3173 Isothermal Buffer和5×Best PCR Buffer。10×3173 Isothermal Buffer用于恒温PCR扩增,其反应温度不能超过70℃。5×Best PCR Buffer用于常规PCR扩增,94℃预变性时间不可超过5min。
产品特点:
- 同时具有较强的延伸能力和逆转录活性;
- 耐热性能极强,对于复杂模板的扩增活性强;
- 强烈的链置换活性,可应用于LAMP检测。
产品应用:
- 恒温PCR扩增;
- LAMP和RT-LAMP;
- 链置换基因合成;
- 在60-70℃之间具有反转录活性,可用于单管RT-PCR。
产品组成:
组分 |
250U |
2500U |
3173 DNA Polymerase (5U/μl) |
50μl |
500μl |
10×3173 Isothermal Buffer |
1ml |
5ml |
5×Best PCR Buffer |
1ml |
5ml |
储存:-20℃可保存3年。
单位定义:
一个活力单位即在65℃条件下,30分钟内催化25nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。
使用方法:
一、以DNA为模板进行PCR扩增
- 50μl反应体系配制:
成分 |
用量 |
3173 DNA Polymerase (5U/μl) |
1μl |
5×Best PCR Buffer |
10μl |
dNTP Mixture (2.5mM each) |
4μl |
模板DNA |
1ng~1μg |
上游引物(10μM) |
5μl |
下游引物(10μM) |
5μl |
ddH2O |
Up to 50μl |
- PCR扩增循环参数:
循环数 |
温度 |
时间 |
1st Cycle |
90℃ |
2min |
25-40 Cycles |
90℃ |
15s |
Tm |
15s |
72℃ |
1kb/1min |
Last Cycle |
72℃ |
5min |
二、以RNA为模板进行RT-PCR扩增
- 50μl反应体系配制:
成分 |
用量 |
3173 DNA Polymerase (5U/μl) |
1μl |
5×Best PCR Buffer |
25μl |
dNTP Mixture (10mM each) |
5μl |
模板RNA |
10ng~1μg |
上游引物(10μM) |
2μl |
下游引物(10μM) |
2μl |
ddH2O |
Up to 50μl |
- PCR扩增循环参数:
循环数 |
温度 |
时间 |
1st Cycle |
60℃ |
60min |
35 Cycles |
90℃ |
15s |
57℃ |
15s |
72℃ |
1kb/1min |
Last Cycle |
72℃ |
5min |
三、缺刻恒温PCR扩增
- 50μl反应体系配制:
成分 |
用量 |
3173 DNA Polymerase (5U/μl) |
1μl |
10×3173 Isothermal Buffer |
5μl |
dNTP Mixture (10mM each) |
5μl |
模板DNA |
10ng~1μg |
引物(500μM) |
5μl |
ddH2O |
Up to 50μl |
- 扩增程序:
55℃孵育2~8h。
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规格:1,500U|300U|150U
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 100%
BalbBuffer 2.1: 75%
BalbBuffer 3.1: 25%
CutSmart Buffer: 75%
特性:
重组酶。
反应条件:
BalbBuffer 1.1,37℃。
热失活:65℃ 20 分钟。
浓度:
5,000units/ml。
甲基化敏感性:
对哺乳动物基因组DNA CpG甲基化敏感。
注意事项:
延时酶切条件下可能出现星号活性。
名称:BsrI限制性内切酶
货号:SV0233
规格:5KU|1KU|500U
在不同反应缓冲液的活性
BalbBuffer 1.1: <10%
BalbBuffer 2.1: 50%
BalbBuffer 3.1: 100%
CutSmart Buffer: 10%
特性
省时酶。
反应条件
BalbBuffer 3.1,65℃。
热失活:80℃ 20 分钟。
浓度
10,000units/ml
37℃ 时活性
20%。
甲基化敏感性
对 dam、dcm 和哺乳动物 CpG 甲基化均不敏感。
名称:ClaI限制性内切酶
货号:SV0289
规格:5KU|1KU|500U
在不同反应缓冲液的活性:
BalbBuffer 1.1: 10%
BalbBuffer 2.1: 50%
BalbBuffer 3.1: 50%
CutSmart Buffer: 100%
特性:
CutSmart、重组酶、省时酶。
反应条件:
CutSmart 缓冲液,37℃。
热失活:65℃ 20 分钟。
浓度:
10,000units/ml。
甲基化敏感性:
对dam和哺乳动物CpG甲基化敏感。
注意事项:
Clal是BspDl的完全同裂酶。
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