特别提示：包括SARS-CoV-2新型冠状病毒RT-PCR试剂盒(N基因，电泳法)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：SARS-CoV-2新型冠状病毒RT-PCR试剂盒(N基因，电泳法)
英文名称：SARS-CoV-2 RT-PCR Kit(N Gene)
产品货号：BTN13-81920y
产品规格：50次

本试剂盒是我司根据PCR原理开发，用于体外定性检测人鼻咽拭子、痰液及肺泡灌洗液中的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)的N基因，仅作为应对SARS-CoV-2感染的肺炎疫情期间的体外诊断应急使用。在使用上应遵守《中国CDC新冠肺炎实验室检测技术指南》、《新型冠状病毒感染的肺炎防控方案》等文件（现行版）的相关要求。可用于科研领域快速检测2019新型冠状病毒。

试剂盒特点：
1．一站式，用户不需要单独准备每种成分，包括引物和对照。
2．根据2019新型冠状病毒的N基因序列设计的引物，具有良好的特异性。
3．灵敏度可以达到1000拷贝/反应。
4．使用一管式RT-PCR技术，RT和PCR两步在一个试管内完成，不需要中间转移样品，降低了操作误差和可能的污染。
5．本产品足够50次20μL体系的RT-PCR。
6．本产品只能用于科研，不能用于临床。

试剂盒组成：
 

组分	规格
5×RT-PCR Buffer	200μL
MMLV-Taq Mix	75μL
SARS-CoV-2 N基因RT-PCR引物混合液	100μL
SARS-CoV-2 N基因RT-PCR阳性对照 (1×10E8拷贝/μL)	50μL
超纯水	1mL

保存条件：-20℃保存，保存期限为12个月。收到货后阳性对照需要跟其他成分分开放置，因为其容易污染其他成分，造成假阳性。

使用方法：

一、样品RNA的制备
1．如果有N个样品，必须设置N+2个提取，多出的一个是PC（样品制备阳性对照），一个是NC（样品制备阴性对照）。可以用10μL SARS-CoV-2冠状病毒N基因RT-PCR阳性对照的10000倍稀释液作为制备的阳性对照。可以用水作为制备的阴性对照。制备所得成为样品RNA。
2．用自选方法纯化N+2个样品的RNA，本试剂盒跟市场上大多数病毒RNA提取试剂盒兼容。也可以选购本公司柱式病毒RNA提取试剂盒（货号：BTN71001）。

二、设置RT-PCR反应（20μL体系）
3．按照下表在PCR管中加入下列成分：
 

成分	样品管	RT-PCR 阴性对照	RT-PCR 阳性对照
5×RT-PCR Buffer	各4μL	4μL	4μL
SARS-CoV-2 N基因RT-PCR引物混合液	各2μL	2μL	2μL
RNA样品	各12.5μL	-	-
超纯水	-	12.5μL	-
SARS-CoV-2 N基因RT-PCR阳性对照10000倍稀释液	-	-	12.5μL
MMLV-Taq Mix	各1.5μL	1.5μL	1.5μL

4．上机进行RT-PCR，RT-PCR反应参数为：
 

过程	温度	时间
逆转录	42℃	30min
预变性	95℃	5min
PCR反应 (35个循环)	95℃	30sec
	53℃	30sec
	72℃	20sec
延伸	72℃	7min

5.琼脂糖电泳检测扩增效果。如果阴性对照有扩增产物或阳性对照无扩增产物，则说明实验失败，需要分析实验失败的原因。只有在阴性对照没有扩增产物、阳性对照有预期扩增产物的情况下，才有必要分析样品的实验结果，如果有预期片段大小的扩增产物则为阳性，如果无则为阴性。

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