特别提示：包括SARS-CoV-2 M蛋白基因质粒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：SARS-CoV-2 M蛋白基因质粒
英文名称：SARS-CoV-2 M gene plasmid
产品货号：YTB3023
产品规格：1μg|100μg

SARS-CoV-2 M基因质粒是我公司推出的哺乳动物细胞表达质粒，用于表达C端带有Myc标签的新冠病毒M蛋白，可以使用抗Myc标签的抗体来识别M蛋白的表达，或进行免疫共沉淀分析等。该质粒含有CMV启动子，可以高效启动目的蛋白在细胞中的表达，质粒为氨苄青霉素抗性。

M蛋白是冠状病毒四个结构蛋白之一，由M基因编码，含有3个跨膜结构域和一个保守结构域。M蛋白是一种跨膜糖蛋白(membrane glycoprotein)，大部分结构陷于膜内。M蛋白N-端亲水性末端突出于膜的外表面，C-端亲水区位于病毒粒子内部，能与病毒衣壳相互作用。M蛋白主要参与病毒组装，促进膜弯曲(curvature)以及结合至核衣壳(nucleocapsid)上。M蛋白的保守结构域对于病毒装配非常重要，主要通过M-M、M-S和M-N蛋白相互作用，参与病毒复制装配和出芽。此外，SARS-CoV M蛋白还能抑制I型干扰素的产生。

SARS-CoV-2 M基因质粒的主要信息如下：
 

Feature Nucleotide	Position
CMV promoter	232-819
T7 promoter and T7 primer binding site	863-882
Multiple cloning site	895-922
M protein	923-1589
Myc-tag	1589-1618
BGH pA	1665-1889
f1 origin of ss-DNA replication	1935-2363
SV40 promoter	2368-2711
Neomycin resistance ORF	2773-3567
SV40 polyA signal	3741-3871
pUC origin	4254-4924
Ampicillin resistance ORF	5069-6065
bla promoter	5964-5970

SARS-CoV-2 M基因质粒(6065bp)的图谱如下：


SARS-CoV-2 M基因质粒的多克隆位点的详细图谱如下：


SARS-CoV-2 M基因质粒中没有的酶切位点包括：
 

AfeI	AleI	AscI	AsiSI	BaeI	BamHI	BbvCI
BmgBI	BsgI	BsmBI	BspDI	BspEI	BstEII	BstXI
Bsu36I	ClaI	EcoNI	EcoRI	EcoRV	Esp3I	FseI
HpaI	NotI	PacI	PmlI	PshAI	SacII	SbfI
SfiI	SrfI	SwaI	XcmI

SARS-CoV-2 M基因质粒中的单酶切位点包括：
 

Acc65I	G`GTAC,C	917	NdeI	CA`TA,TG	1161
AflII	C`TTAA,G	908	NheI	G`CTAG,C	1279
AgeI	A`CCGG,T	1151	NruI	TCG|CGA	1319
AhdI	GACNN,N`NNGTC	5142	PaeR7I	C`TCGA,G	1420
ApaI	G,GGCC`C	1638	PciI	A`CATG,T	1420
AvrII	C`CTAG,G	2691	PflFI	GACN`N,NGTC	1500
BcgI	,NN`(N)10CGA(N)6TGC(N)10,NN`	5647	PflMI	CCAN,NNN`NTGG	1656
BglII	A`GATC,T	12	PluTI	G,GCGC`C	484
BlpI	GC`TNA,GC	1199	PpuMI	RG`GWC,CY	895
BmtI	G,CTAG`C	899	PspOMI	G`GGCC,C	208
Bpu10I	CC`TNA,GC	180	PspXI	VC`TCGA,GB	1622
BsaBI	GATNN|NNATC	2760	PstI	C,TGCA`G	2954
BseRI	GAGGAG(N)8,NN`	2687	PvuI	CG,AT`CG	5512
BsiWI	C`GTAC,G	1235	RsrII	CG`GWC,CG	3417
BsmI	GAATG,CN`	3821	SacI	G,AGCT`C	818
BsrGI	T`GTAC,A	1582	ScaI	AGT|ACT	5622
BssHII	G`CGCG,C	3298	SexAI	A`CCWGG,T	2458
BstBI	TT`CG,AA	3583	SfoI	GGC|GCC	2902
BstZ17I	GTA|TAC	3873	SgrAI	CR`CCGG,YG	1151
CspCI	,NN`(N)11CAA(N)5GTGG(N)10,NN`	626	SmaI	CCC|GGG	2714
DraIII	CAC,NNN`GTG	2168	SnaBI	TAC|GTA	590
EagI	C`GGCC,G	2807	SpeI	A`CTAG,T	249
Eco53kI	GAG|CTC	816	StuI	AGG|CCT	2690
HindIII	A`AGCT,T	911	TspMI	C`CCGG,G	2712
KasI	G`GCGC,C	2900	Tth111I	GACN`N,NGTC	3019
KpnI	G,GTAC`C	921	XhoI	C`TCGA,G	1622
MfeI	C`AATT,G	161	XmaI	C`CCGG,G	2712
NarI	GG`CG,CC	2901

SARS-CoV-2 M基因质粒中推荐使用的测序引物序列如下：
primer (829-848):5"- CTAGAGAACCCACTGCTTAC -3"
primer (1659-1676):5"- TAGAAGGCACAGTCGAGG -3"

使用说明：
 

• 首次使用1μg包装的本产品时，请先取少量本质粒转化大肠杆菌，进行质粒小量、中量或大量抽提后再用于后续用途。抽提获得的质粒可以通过酶切电泳进行鉴定，或通过测序进行鉴定。
• 100μg包装的本产品质粒浓度为0.1μg/μl，共1ml。可以直接用于酶切或者转染细胞。

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BTN130803 单细胞裂解液(DNA提取) 1mL
BTN130805 单细胞悬浮液 1mL
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BTN140374 大肠杆菌DH10B化学感受态细胞 0.1mL*10
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名称：大肠杆菌DH10B化学感受态细胞
货号：BTN140374
规格：0.1mL*10
本产品是采用大肠杆菌DH10B菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用于DNA的化学转化。

产品特点：
1. 使用 pUC19质粒检测，转化效率可达10，-80℃保存几个月转化效率不发生改变。
2.可用于高效转化150Kb大小的质粒，可用于蓝、白斑筛选。
3. DH10B菌株基因型：F- mcrA Δ(mrr -hsdRMS-mcrBC)Φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1araD139 Δ(ara,leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG
4. 本产品质量稳定，使用方便，质优价廉。

储存条件：干冰运输、-80℃保存，有效期半年。

自备试剂：目的DNA、SOC或LB培养基等

使用方法：
1. 取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。
以下实验以100μL感受态细胞为例。
2. 待感受态细胞融化后，向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA，通常100μl感受态细胞能够被1ng超螺旋质粒DNA 所饱和)，用移液器轻轻吹打混匀，冰浴30分钟。
3. 42℃热击90秒，迅速将离心管转移到冰浴中，冰上静置2-3分钟。
4. 每个离心管中加入450μl 无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素)，混匀后置于37℃摇床，150rpm 振荡培养45分钟使菌体复苏。
5. 根据实验需求，取适量已转化的感受态细胞，加到含有相应抗生素的LB 固体琼脂培养基上，用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开，将平板置于37℃直至液体被吸收，倒置培养，37℃培养12-16小时。

注意事项：
1、涂布用量可根据具体实验调整。若转化的DNA 总量较多，可取少量转化产物涂布平板；若转化的DNA总量较少，可取200-300μl转化产物涂布平板。若预计的克隆数较少，可通过离心(4,000rpm ，2分钟)后吸除部分培养液，悬浮菌体后将其涂布于平板中。
2、新制备的固体培养基不易涂干，可将平板正置于37℃直至液体被吸收后再倒置培养。
3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的转化菌落数过少，可以将剩下的菌液再涂布新培养基进行培养。