特别提示：包括可视化SARS-CoV-2核酸检测试剂盒(N基因,橙绿变色)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：可视化SARS-CoV-2核酸检测试剂盒(N基因,橙绿变色)
英文名称：OTG SARS-CoV-2 RT-LAMP kit，N Gene
产品货号：MT2502-06
产品规格：96T

本试剂盒采用LAMP扩增技术配合可视化技术，进行SARS-CoV-2的RNA扩增检测。试剂盒灵敏度极高，可达10 copies。肺泡灌洗液、拭子浸泡液可直接用于检测（不需要核酸提取），唾液、痰液、血清、血浆、含高盐病毒保存液样本需要核酸提取。该试剂盒的灵敏度为10copies（检出率100%，单copy检出率30-50%），假阳性比例<1%。

该试剂盒的靶标基因为N基因，靶标序列如下：
ATTCCCTCGAGGACAAGGCGTTCCAATTAACACCAATAGCAGTCCAGATGACCAAATTGGCTACTACCGAAGAGCTACCAGACGAATTCGTGGTGGTGACGGTAAAATGAAAGATCTCAGTCCAAGATGGTATTTCTACTACCTAGGAACTGGGCCAGAAGCTGGACTTCCCTATGGTGCTAACAAAGACGGCATCATATGGGTTGCAACTGAGGGAGCCTTGAATACACCAAAAGATCACATTGGCACCCGCAATCCTGCTAACAATGCTGCAATCGTGCTACAACTTCCTCAAGGAACAACATTGCCAAAAGGCTTCT.

试剂盒组成：
 

组分	规格
SARS-CoV-2 N Assay(冻干制品)	2支
2×LAMP Buffer D	1ml
阳性对照(冻干制品)	1支
ddH2O	1ml
OTG变色反应管盖	96T

保存：-20℃，1年有效。本试剂盒可于室温运输，其在室温条件下稳定15日。

应用实例：

以SARS-CoV-2体外转录RNA为模板，1-6分别为1、10、10²、10³、10⁴和10⁶Copy，NTC为ddH2O为模板。65℃反应20min。

注意事项：
 

• 唾液、痰液、血清、血浆、高盐病毒保存液制作的样本，必须核酸提取后再使用。核酸纯化样品，使用量为5μL。


• 关于粗制样品的使用说明：由于LAMP反应温度为65℃，且反应Buffer中含有去污剂，因此，理论上咽拭子、肛拭子，浸泡于0.5ml ddH2O后，可以直接作为扩增模板。在加热的过程中病毒分子在高温和去污剂的作用下，裂解并释放RNA分子作为扩增模板。


• 本试剂盒未做活毒测试，无法提供相应数据支持。

使用方法：
 

• OTG染料已经预先加入在EP管盖上，为干粉形式，其牢固的结合在管盖上，仅有反应完毕后，将EP管倒置后才能将其溶解，溶解后其将立即终止LAMP反应，并与LAMP反应产物形成鲜亮的绿色可见光。在配制反应液和反应过程中务必不能将EP管盖上的染料混入反应液中，否则会导致LAMP反应终止。


• 每一支SARS-CoV-2 N Assay冻干品可用于50人份的检测反应，首次使用前用250μl的ddH2O溶解该制品。未使用完的该制品，可短期保存于4℃（1周内使用）。阳性对照用200μl的ddH2O溶解。


• 配制反应体系
  在本试剂盒提供的0.2ml EP反应管中加入下述试剂
   

  成分	用量
  溶解后的SARS-CoV-2 N Assay冻干品	5μl
  2×LAMP Buffer D	10μl
  检测样品	5μl

  
  全部试剂加入完毕后，轻弹EP管底部后，再盖上含OTG染料的EP管盖（盖上管盖后务必不能再剧烈混合与倒置，以防止将管盖上的OTG染料溶解，OTG染料一旦混入反应液中将会终止LAMP反应）。


• 反应体系配好后，静置于65℃反应20min。


• 观察结果
  反应结束后，将所有反应管从水浴锅取出，室温冷却2分钟，并用力再次压紧管盖，以防止溶液从反应管泄露。反应管外侧多余的水，可用纸巾擦拭干净。将反应管倒置过来，轻甩一次，将反应液甩至管盖上，覆盖OTG染料，倒置30秒（可倒置在纸巾上）。管盖上的OTG染料溶解后，再将反应管正置过来，轻甩一次，将溶液甩至管底部。肉眼观察反应液颜色变化进行结果判读（可拍照留存数据）。


• 结果判读
   

  	阴性对照	阳性对照	样品	判读结果
  A	橙黄色		绿色	阳性（+）
  B		绿色	橙黄色	阴性（-）
  C	绿色		绿色	不能判断为阳性，需重检测
  D		橙黄色	橙黄色	不能判断为阴性，需重检测

特殊说明：
 

• 该方法灵敏度实际测试达到10 copies灵敏度。但该方法存在一定比例的假阳性（<1%），因此阳性样品，建议进行复检，复检仍然为阳性，可判读为阳性，否则判读为阴性。


• 阳性对照：在单独检测管中加入5μl本试剂盒提供的阳性标准品。


• 阴性对照：可采用ddH2O，用量同样为5μl。

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