金牌 Mix（green）/PCR系列--性能参数，报价/价格，图片

基本信息

产品名称：

金牌 Mix（green）/PCR系列

英文名称：

国产/进口：

国产

产地/品牌：

TSINGKE

型号：

TSE101

参考报价：

375元/5×1.125 mL

销售商：

北京擎科生物科技有限公司

总点击数：

17938

更新日期：

2024-03-28

产品类别：

分子生物学试剂

性能参数

金牌 Mix（green）
即用型，超高保真度（Taq的30倍），极速延伸（10 s/kb）

【产品特点】
超快的延伸速度（10 s/kb）；
超高的耐热性能（98℃热处理1 h无明显活性变化）；
极强的扩增能力及保真性。

【产品简介】
金牌Mix（Green）为即用型快速PCR预混液，其中包含的DNA Polymerase由基因工程改造GoldenStar T6 DNA Polymerase所得，该聚合酶由Pyrococcus 酶与一种具有增强持续合成能力的结构域融合而成，其扩增错配率是野生型Taq DNA聚合酶的1/30。本产品同时具有5'→3'DNA聚合酶活性和3'→5'外切酶活性，扩增产物为平末端，若纯化后用于T/A克隆，推荐使用平末端克隆试剂盒（目录号∶TSV-007B）。
本产品包含DNA Polymerase、dNTPs以及优化的反应缓冲液，浓度为1.1×，使用时无需额外添加双蒸水补充体系，只需加入引物和模板即可进行扩增。产品中包含上样缓冲液，不包含核酸染料，扩增产物无需额外添加Loading Buffer即可直接点样电泳。

【适用范围】
可用于克隆构建、点突变、SNP 检测等对保真度要求较高的实验，常规基因组DNA、cDNA、质粒、噬菌体 DNA 等模板均适用。请勿使用含尿嘧啶的模板或引物。

【产品组成及保存】
5×1.125 mL，-25~-15℃保存2年

【操作流程】
在PCR管中配制如下反应液，混匀短暂离心后，上机反应

	50 µL 体系
1.1× 金牌 Mix	45 µL
10 µM Primer F	2 µL
10 µM Primer R	2 µL
Template DNA/cDNA	*

*质粒或噬菌体DNA，推荐用量0.05~1 ng；基因组DNA，推荐用量50~500 ng；cDNA推荐稀释5~100倍，取1 µL作模板。注意过量模板容易导致非特异性扩增，过少模板容易导致PCR扩增效率低。

2.反应程序

		温度	时间	循环次数
1	预变性	98 ℃	2 min	1 cycle
2	变性	98 ℃	10 s	30~35cycles
	退火	Tm±5 ℃	10~15 s
	延伸	72 ℃	5~15 s/ kb
3	终延伸	72 ℃	1~5 min	1 cycle

【问题讨论】
Q1：如何验证是否为PCR酶或是模板本身导致的序列突变？
A1：若为单克隆测序突变，以测序质粒为模板重新做扩增，检测是否再次发生突变。若扩增再出现突变为酶导致，若没有发生突变，则代表不是酶导致，而是原始模板本身存在突变导致。
若为其他类型模板测序后发生突变，可用二次PCR扩增来验证，如果同样的酶同样的模板重复扩增，总是在一个位置突变，说明原始模板本身存在突变导致。如果同一模板同一引物不同酶扩增，在同一位置突变，则也是模板本身存在突变导致。反之，则为PCR酶导致的突变。

Q2：PCR扩增没有出现目的条带的原因？
A2：分析PCR反应的每一个关键环节
1）模板：
a．模板纯度差，含有杂蛋白质，盐离子等，选择质量可靠的提取试剂，重新提取高纯度基因组模板。
b．含有尿嘧啶抑制高保真酶的活性，或含有Taq酶抑制剂。
c．模板浓度过高，或含buffer，抑制PCR扩增；若模板为cDNA，建议稀释10~100倍后使用
d．靶序列发生突变或缺失，影响引物与模板特异性结合，或因靶序列某段缺失使引物与模板失去互补序列，导致PCR不能有效扩增。
2）引物：其设计及质量是PCR扩增成败的关键。
a．引物设计不合理，如引物长度不够、引物之间形成二聚体等，需要重新设计引物。
b．合成高质量、高纯度级别的引物。
c．引物应高浓度小量分装保存，防止多次冻融或长期4℃保存，导致引物降解失效。
3）PCR条件：
a．PCR扩增条件：变性温度低、变性时间短都有可能出现扩增无产物；退火温度过低，可导致非特异性扩增而降低特异性扩增效率；退火温度过高影响引物与模板的结合而降低PCR扩增效率。
b．反应体系：反应体系配制错误，建议重复实验。
4）酶失活，建议更换新酶，或新旧两种酶同时使用，以分析是否因酶的活性丧失或活性降低而导致没有产物；酶扩增效率低，建议更换扩增效率高的酶。

Q3：金牌在-20℃，有时部分冻不上？
A3：为了保护DNA聚合酶的活性，在金牌mix里添加了保护剂。如果mix没有混匀，那么低温下水结冻而保护剂没有结冻，就出现了冻不匀的现象。

【实例分享】
使用金牌Mix（green）检测8份感病叶片中的DNA病毒，目的条带900 bp。所有样品均扩增成功且产量高，CK-为健康叶片对照组。

公司简介

北京擎科生物科技股份有限公司（Beijing Tsingke Biotech Co., Ltd.）是一家自主全产业链的基因合成平台型企业，业务范围涵盖合成基因组学产品及服务、生命科学原料及设备、生物制造CXO三大方向。

企业总部位于北京，运营实体和实验室遍布全国，总运营面积超70,000 m²。致力于为全球从事生命科学研究的科研人员及企事业单位提供高质量的生物技术服务和产品，业务覆盖全国并延伸至美洲、欧洲等海外地区，拥有快速响应客户需求的能力，为全球近20万用户提供服务与产品。

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