生化试剂

KOD DNA 聚合酶

基本信息
产品名称:
KOD DNA 聚合酶
英文名称:
KOD DNA
国产/进口:
国产
产地/品牌:
雅吉生物
型号:
101002-250
参考报价:
总点击数:
1386
更新日期:
2025-10-10
产品类别:

性能参数
产品及特点
KOD DNA Polymerase 是从克隆有 Thermococcus kodakaraensis DNA
聚合酶基因的质粒在大肠杆菌中经诱导表达分离纯化而来。该酶所具有的超强 3’
→ 5’外切酶活性使得其扩增保真性比 Pfu DNA Polymerase 更高,保真性是 Taq
的约 50 倍,同时具有合成速度快的特点,聚合速度约为普通 Pfu DNA Polymerase
的 5 倍,Taq DNA Polymerase 的 2 倍,达到 100-138 bp/秒,可以在短时间内
获得高产量的扩增产物,特别适合于高保真地扩增 6 kb 以内的 PCR 产物,扩增所
得的 DNA 为平末端,可用于基因克隆、表达及突变分析等分子生物学实验。
规格及成分
成 份
编 号
塑料袋包装
KOD DNA 聚合酶 (5 U/uL)
101002a
50 uL
10×KOD DNA 聚合酶缓冲液
101002b
1.0 mL
使用手册
101002sc
1 份
 
运输及保存
低温运输,-20℃保存、有效期一年。
自备试剂
DNA 模板、引物、超纯水
使用方法
一、建议PCR条件(以50 μL反应体系为例)
注:实际操作中计算好需补加水的量后,建议先加水,然后按上述顺序添加其它成
分,最后添加KOD DNA聚合酶。最好在冰浴上混合PCR各种成分,防止KOD DNA
聚合酶降解引物和模板。待各成分充分混匀后,离心数秒,使反应混合物沉到管底。
然后将反应管置于PCR仪中进行扩增。
 
二、关于PCR条件的优化
成分
体积
终浓度
模板
-
<0.5μg
正向引物(10 μM)
1 μL
0.2 μM
反向引物(10 μM)
1 μL
0.2 μM
10×KOD DNA 聚合酶缓冲液
5 μL
dNTP Mixture(10mM each)
1 μL
0.2 mM
KOD DNA 聚合酶
0.25-0.5 μL
(1.25-2.5U)
-
超纯水
补足到 50 μL
-1. 质粒或者噬菌体模板(模板量5-20 ng,循环参数如下表)
2. 基因组DNA和cDNA模板(基因组DNA模板量为50-100 ng,1-2 μL cDNA
(起始转录用的RNA为500 ng),循环参数如下表)
循环参数
目标 DNA
<2 kb
Step 1
94C 2 分钟
Step 2
94C 20-30 秒
Step 3
Ta 15-20 秒
Step 4
72C 20-60 秒
Step 5
72C 5 分钟
Repeat step 2-4 for 30-35 个循环
Ta= Tm - 5C
循环参数
目标 DNA
<1 kb
目标 DNA
<2 kb
目标 DNA
3-4 kb
目标 DNA
5-6 kb
Step 1
94C 2 分钟
94C 2 分钟
94C 2 分钟
94C 2 分钟
Step 2
94C 20 秒
94C 20 秒
94C 20 秒
94C 30 秒
Step 3
Ta 20 秒
Ta 20 秒
Ta 20 秒
Ta 30 秒
Step 4
72C 20 秒
72C 30 秒
72C 40 秒
72C 60 秒
Step 5
72C 5 分钟
72C 5 分钟
72C 5 分钟
72C 5 分钟
Repeat step 2-4 for 30-35 个循环
Ta= Tm-5C
相关资料
活性定义
1 U 指 75℃条件下,30 分钟内使 10 nmoles 的 dNTPs 掺入酸不溶性沉淀
物所需要的酶量。
问题解决
问题
可能的原因
解决方法
没有PCR产
设计的扩增靶序
列太长
设计稍短的扩增靶序列,以基因组DNA为模
板KOD适合扩增不超过2kb左右的产物,以
质粒和噬菌体DNA为模板适合扩增6 kb以
下的DNA。
PCR条带弥
没有在冰上混合
PCR反应液
KOD扩增延伸速
PCR 反应液应该在冰上混合,KOD DNA聚
合酶应该最后加,以防止KOD DNA聚合酶
降解引物和模板。度为1Kb/15-30
秒,具有比其它聚
合酶更快的延伸
速度延伸时间过
长,有时会有拖尾
弥散效应。
如出现拖尾效应,可缩短退火延伸时间或者
减少酶量。
低产量
模板为高GC含量
模板量太低
加入DMSO 2-5%,由于该酶的耐热性好,
在应用于GC 含量高的模板等以及易产生高
级结构的模板时,可在96℃以上进行变性。
提高模板量
 
关联产品
公司简介
       上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月,是一家面向生命科学领域,科研机构、高校、院所及企业产品开发研究提供所需要的科研类试剂、耗材、仪器、技术服务等。包括分子生物学、免疫学、微生物学、细胞学,通过公司各个部门所有员工的共同努力在行业内拥有较高知名度,深得新老客户的厚爱,本着“优质、服务、信誉”的精神,坚持以先进的技术、优质的产品、良好的信誉,为国内外广大用户提供优质生物产品和服务。公司在重视产品质量的同时,也建立了一套集技术支持、物流、售后服务等多个部门联动服务体系,努力把我们方便、快捷、周到的服务提供给每一个客户本研究所郑重承诺:质量保证、供货及时、服务周到,公司总投资超过2000万元,并先后引进了自动化设备,组建了专业的研发技术团队。凭借着洁净化的生产车间、标准化的质量管理系统,为生产高质量的产品提供了有效保证。
     雅吉生物自主研发的ELISA试剂盒,在国内众多重点实验室广泛使用,深受广大科研人员的好评,先后在权威杂志文章中被引用。
 
上海雅吉生物科技有限公司以极强的职业精神,积极、负责、坦诚的服务令我们的客户满意! 
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