I-5™ 2×High-Fidelity Master Mix/PCR试剂--性能参数，报价/价格，图片

基本信息

产品名称：

I-5™ 2×High-Fidelity Master Mix/PCR试剂

英文名称：

I-5™ 2×High-Fidelity Master Mix

国产/进口：

国产

产地/品牌：

擎科生物

型号：

TP001

参考报价：

1200元/5×1.0 mL

销售商：

北京擎科生物科技有限公司

总点击数：

2529

更新日期：

2024-03-28

产品类别：

分子生物学试剂

性能参数

I-5™ 2×High-Fidelity Master Mix
超高保真度（Taq的60倍），极速延伸（5~15 s/kb）

【产品简介】
本产品为产品简介2×浓度的快速扩增PCR预混液，其中包含的I-5^TM高保真DNA polymerase集超高保真度及超强扩增于一体，在扩增中展现出极高的准确率。本产品适用于基因克隆、SNP测序分析等对保真度要求较高的扩增实验。本产品包含DNA polymerase、Buffer、dNTP等组分，只需添加引物和DNA模板，并使用ddH₂O补足体系即可进行PCR扩增。扩增完成后，可取适量扩增产物与6×Orange Loading Buffer按比例混合后，进行电泳检测。本产品扩增产物为平末端，若纯化后用于T/A克隆，推荐使用平末端克隆试剂盒（目录号：TSV-007B）。

【产品特点】
超高的保真度∶保真度为野生型Taq DNA polymerase的60倍;
极快的延伸速度∶10~15 s/kb;
超强的扩增能力∶兼容复杂模板、长片段扩增。

【适用范围】
适用于基因克隆、SNP测序分析等对保真度要求较高的扩增实验。。

【产品组成及保存】
-25~-15℃保存，保质期2年

组分	规格
I-5^™2× High-Fidelity Master Mix	5×1.0 mL
6 ×Orange Loading buffer	2×1.0 mL

【操作流程】
1. 在PCR管中配制如下反应液，混匀短暂离心后，上机反应。

	25 µL 体系	50 µL 体系
I-5^™2× High-Fidelity Master Mix	12.5 µL	25 µL
10 µM Primer F	1 µL	2 µL
10 µM Primer R	1 µL	2 µL
Template DNA	*	*
ddH₂O	Up to 25 µL	Up to 50 µL

*质粒或噬菌体DNA，推荐用量0.05~1 ng；基因组DNA，推荐用量50~500 ng；cDNA推荐稀释5~100倍，取1 µL作模板。
注意过量模板容易导致非特异性扩增，过少模板容易导致PCR扩增效率低。

2. 反应程序

		温度	时间	循环次数
1	预变性	98 ℃	2 min	1 cycle
2	变性	98 ℃	10 s	25~35 cycles
	退火	45~68 ℃	10~15 s
	延伸	72 ℃	5~15 s/kb
3	终延伸	72 ℃	1~5 min	1 cycle

【问题讨论】
Q1：收到PCR Mix后如何储存和使用？
A1：聚合酶应储存在-20℃的无霜冰箱中（可接受范围在-15℃~-23℃之间）。不建议在-70℃或-80℃下长期储存（超过一周）。酶不可以在室温下保存。在打开一管新酶之前，简单离心以集液于管底。

Q2：I-5^TM解冻时有时会看到管中有絮状物，影响扩增吗？
A2：这是PCR buffer中的活性物质，有时低温会导致其析出，只要PCR Mix完全融化后，轻轻震荡后即可溶解，不影响酶活和后续PCR扩增。

Q3：定点突变实验一般推荐使用什么产品，为什么？
A3：定点突变是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段（可以是基因组，也可以是质粒）中引入所需变化（通常是表征有利方向的变化），包括碱基的添加、删除、点突变等。
点突变实验需保证序列的准确性，所以应该使用高保酶（推荐 I-5^TM2×High-Fidelity Master Mix，TSP001）进行扩增序列。另外，为提高成功率推荐搭配无缝克隆试剂SoSoo（TSV-S1），多点突变也可免去融合PCR的步骤，操作更加方便。

Q4：什么是Overlap PCR？什么酶适用于做Overlap PCR？
A4：Overlap PCR（重叠PCR）技术是采用具有互补末端的引物，使PCR产物形成重叠链，从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸，将不同来源的扩增片段重叠拼接起来。该技术成功的关键是重叠互补引物的设计。Overlap PCR在基因的定点突变、融合基因的构建、长片段基因的合成、基因敲除以及目的基因的扩增等方面有其广泛而独特的应用。
为了保证做Overlap PCR时不引入额外突变，建议使用高保真酶扩增，推荐I-5^TM 2×High-Fidelity Master Mix（TP001）。

【实例分享】
以两个油菜cDNA为模板，用I-5^TM2× High-Fidelity Master Mix扩增3.7 kb的目的条带。扩增产物特异性好，产量高。

公司简介

北京擎科生物科技股份有限公司（Beijing Tsingke Biotech Co., Ltd.）是一家自主全产业链的基因合成平台型企业，业务范围涵盖合成基因组学产品及服务、生命科学原料及设备、生物制造CXO三大方向。

企业总部位于北京，运营实体和实验室遍布全国，总运营面积超70,000 m²。致力于为全球从事生命科学研究的科研人员及企事业单位提供高质量的生物技术服务和产品，业务覆盖全国并延伸至美洲、欧洲等海外地区，拥有快速响应客户需求的能力，为全球近20万用户提供服务与产品。

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