超多重超灵敏EGFR六色数字PCR™试剂盒
EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit在naica®6色微滴芯片数字PCR系统上实现cfDNA样本的超多重分析：
EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit使用TaqMan™ 探针技术用于检测8个点突变，同时使用drop-off方法检测24个19外显子缺失和20外显子插入（图1）。
图1. EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit探针设计，包含TaqMan™探针在每个Exon的位置和标记染料
应用亮点：
☑ EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit单孔实验可靠高灵敏的检测32种的EGFR体细胞突变，包含常见的、稀有的活化突变和耐药突变。
☑ EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit可在naica®6色微滴芯片数字PCR系统上进行超敏且稳定的EGFR突变检测，不同位点的检测限LOD在0.30 - 0.46 cp/µL之间。
☑ 使用Crystal Miner软件和定制EGFR 6色数据分析模板可快速、直接分析NSCLC患者cfDNA样本。
单孔检测NSCLC样本中>90%的EGFR突变：
液体活检是对非固体生物样本的取样和分析，最常见的是血液。液体活检是一种微创和直接的采样方法，可以克服肿瘤的异质性，使用循环肿瘤DNA（ctDNA），用于肿瘤生物标志物分析。
ctDNA检测需要一种高灵敏度和高可靠性的检测技术，以精准定量在高背景野生型基因中较低水平的突变基因。数字PCR已成为下一代液体活检分析的强大技术。
法国Stilla Technologies的naica®6色微滴芯片数字PCR系统是一种超灵敏的数字PCR技术，能够同时准确地定量单个样本中的大量生物标志物，简化检测过程，最大限度地减少检测差异，并显著缩短实际操作时间。
非小细胞肺癌（NSCLC）是全球癌症高死亡率的主要原因。表皮生长因子受体（EGFR）突变是NSCLC中众所周知的致病变异。超多重EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit 可以使用循环游离DNA（cfDNA）检测NSCLC中90%以上的EGFR突变，包括外显子18、19、20和21中32个常见的、稀有的活化位点和耐药位点（表1）。
表1EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit检测EGFR突变
EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit在naica®6色微滴芯片数字PCR系统上实现超灵敏检测
EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit适用于高灵敏naica®6色微滴芯片数字PCR系统。为确定各EGFR靶点的检测灵敏度，空白限LOB和检测限LOD的测定参照美国临床实验室标准协会(CLSI) EP17-A2标准(Protocols For Determination Of Limits Of Detection And Limits Of Quantitation; Approved Guideline)。EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit检测EGFR突变的空白限LOB范围0.06 - 0.17 copies /µL之间，检测限LOD范围0.30 - 0.46 cp/µL（表2）。
表2. 根据CLSI EP17-A2标准测定EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ kit的LOB和LOD（Sapphire芯片，反应体系中的拷贝数cp/ul）
为了评估EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit的灵敏度，在120 cp/µL野生型EGFR DNA 的背景下，采用线性梯度检测方法检测EGFR Exon19号外显子缺失、Exon20号外显子插入、L858R、G719A、L861Q、T790M、C797S（GC）和C797S（TA）突变，浓度从64 cp/µL稀释到到0.25 cp/µL(图3)。EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit可超敏且稳定的检测出所有突变。
图3.在野生型EGFR 120 cp/µl(3000copies每25µl)的背景下，测定EGFR Exon19号外显子缺失、Exon20号外显子插入、L858R、G719A、L861Q、T790M、C797S (GC)和C797S (TA)突变（理论浓度64cp/µl、32 cp/µl、16 cp/µl、8 cp/µl、4cp/µl、2 cp/µl、1 cp/µl、0.5 cp/µl和0.25 cp/µl）。使用合成的Ultramer™突变DNA模板(大小从97到124个核苷酸)和野生型人类基因组DNA。图中显示的是每个突变的≥三次重复的平均值和标准误差。
EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit在naica®6色微滴芯片数字PCR系统上具有超高重复性
EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit批间检测高度重复，不同目标基因定量检测的RSDs(相对标准偏差)范围为4.5 ~ 8.6% (N = 12)（图4）。
图4. EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ kit的批间重复性。通过用EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit比较12个不同批次(N = 12)中1个阳性对照样品获得的结果测定批间重复性
EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit在naica®6色微滴芯片数字PCR系统上具有超高特异性
EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit具有高特异性，无假阳性出现（表3）。
表3 使用EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit在naica®6色微滴芯片数字PCR平台进行特异性检测。
使用合成的Ultramer™突变DNA和野生型人类基因组DNA作为模板进行重复反应
EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit与Crystal Miner软件结合提供的数据分析模板直接生成2D图(图5)，并快速获得高度一致的结果。
图5. 使用Crystal Miner软件和个性化的EGFR 6-color Crystal Digital PCR™ Kit分析模板分析L858R和T790M阳性的NSCLC cfDNA样本的示例。cfDNA样本在预期结果和测量结果之间显示出完美的一致性。x轴和y轴对应相应通道的荧光强度
艾普拜生物科技（苏州）有限公司为国家级高新技术企业、苏州市领军人才企业，通过ISO13485和ISO9001质量体系认证。获得与核酸微量检测以及数字PCR检测相关的多项国家授权专利和软件著作权，获批多个与多重PCR技术平台相关的产品注册证和产品备案证。在分子生物学研究及实验技术等硬件和软件方面具有坚实的基础和丰富的经验，建设有快速PCR、快速定量PCR、国际领先的数字PCR检测平台、显微成像获取与分析等仪器研发平台；建设有微量核酸检测开发平台，持续开发与疾病相关分子及细胞遗传学检验、靶向用药指导等分子诊断检测数临床检测产品，拥有技术过硬的研发团队，承担多项省部级技术研发课题。
