货号:LV-RLSE001
细胞数:1 million/vial
产品形式:冻存(现货/P1代)、新鲜培养(需定制)
报价:询价(19902901483)
用途:仅用于科学研究与生物医药研发。
大鼠肝窦内皮细胞
Rat sinusoidalendothelial cell
(可贴壁,Cat# LV-RLSE001)
(仅用于科学研究)
您使用时,请按随货的说明书操作,如有任何疑问可咨询公司技术人员。
I 简介
肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cells, LSEC)在肝脏的生理功能和病理机制的发生中扮演重要的角色, 成为近年来肝脏研究的热点。本产品采用酶灌注消化法分离至SPF级大鼠,保留了细胞在体内的生物活性;通过梯度离心除掉了其它肝脏细胞,具有超高纯度(>90%)。经检测无细菌、真菌、放线菌等污染,细胞活力高(冻存>85%,新鲜培养>95%)。
II 试剂与材料
-大鼠肝窦内皮细胞(Cat# LV-RLSE001)
-复苏培养基(Cat#LV-Rec001)
-肝窦内皮细胞培养基(Cat# LV-RLSEM001)
-胶原包被培养板(LV-coated)
-碎冰及冰盒
-无菌15ml离心管(冰上预冷)
-一次性移液管
-恒温水浴锅(38℃预热)
-宽口移液枪头(普通枪头剪去尖头,再灭菌使用)
-移液枪
-冷冻水平离心机(带水平转子,可离心15ml离心管)
-生物安全柜
-37℃/5%CO2培养箱
-75%酒精
III 细胞的复苏与铺板
1. 将15ml离心管插入盛有足量碎冰的冰盒中,紫外消毒15min;4℃预冷离心机。
2. 复苏培养基放碎冰中充分预冷,铺板培养基放入38℃恒温水浴锅中充分预热。
3. 将冻存的细胞从冷藏位置迅速转移至38℃恒温水浴锅中。尽可能多的浸入38℃水中,顺时针水平摇动,
但必须确保冻存管管盖保持在水面以上。
4. 解冻冻存管约90-120s,至冻存管中只有少量碎冰漂浮即可。
5. 用75%酒精消毒冻存管,并将其转移到生物安全柜。
6. 用宽口枪头将细胞重悬(轻轻吹打2次),并转移至预冷的15ml离心管中(
注意:冻存管与枪头上残留细胞,可用1ml复苏培养基清洗冻存管与枪头)。
7. 向细胞悬液逐滴加入预冷复苏培养基,每1ml细胞悬液加入10ml复苏培养基(注意:前3ml要缓慢逐滴加入并轻微摇晃,后面7ml可加快速度),最后轻微上下颠倒1次混匀。
8. 300×g,4℃离心5min,去上清并用培养基重悬。
9. 沉淀的细胞用肝窦内皮细胞培养基重悬并定容至4ml,用台盼蓝排除法测定细胞的存活率和细胞总量。
10. 将细胞按3×104cells/cm2接种至胶原包被培养板中。摇匀,在37℃/5% CO2培养箱中培养,24h后换液。
IV 细胞培养与传代
1. 细胞融合度达到80%时可进行传代。
2. 提前将培养基、PBS、胰酶放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内。
3. 吸除旧培养液,加少量PBS润洗细胞,适量胰酶,使加入的胰酶能盖住细胞,37℃孵育,约2~3min。
4. 显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜肝窦内皮细胞培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液(控制吹打的力度,避免产生大量的气泡)。
5. 300×g,室温离心5min,去上清并用培养基重悬。
6. 将细胞悬液按3×10cells/cm接种到新的胶原包被培养瓶/板内, 置37℃/5%CO培养箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
IV 关于售后
如您发现有产品任何质量问题,请您收集原始数据,请第一时间联系公司销售或者技术支持,公司安排人员保证售后。每个实验室条件不同,操作人员习惯不同,熟练程度不一样,实验失败存在客观因素。如未严格按照说明书操作、超过售后时限,公司不做售后,请老师理解与支持。
售后有效期与提供的原始数据:
复苏问题:复苏24小时以内;提供台盼蓝染色或者PI染色。
污染问题:复苏96小时以内;提供相差显微镜照片。
纯度问题:一个月内;提供免疫荧光或者流式结果。
V 联系电话
公司电话:0755-28284050;
技术支持:19902901483(周博士)