NEXTflex™ Methyl-Seq 1 Kit用于富集甲基化DNA，进行单端测序、双端测序和多重测序建库，兼容于

Illiumina测序平台。NEXTflex Methyl-Seq Kit运用甲基化DNA免疫共沉淀（MeDIP ）或者甲基化CpG 区域捕获（MeCAP）检测DNA甲基化区域，使用者可以非常容易的评估基因组的甲基化水平。

这款试剂盒应用“Enhanced Ligation Adapter Technology ”，优势在于连接步骤中可连接更长的接头并可达到更好的连接效率。利用酶预混液、磁珠纯化等方法简化甲基化检测，可减少测序工作者移液步骤和建库消耗的时间。

产品特点：

• 通过较高的全基因组覆盖率来评估甲基化组水平
• 运用甲基化DNA免疫共沉淀（MeDIP）或者甲基化 CG区域捕获（MeCAP）来富集甲基化片段并建库
• 定量DNA甲基化水平
• 鉴别不同甲基化区域（DMRs）
• 与NEXTflex™ Ligation 一起使用，获得较高的接头连接效率
• 6、12、24、48、96和384重接头为建库提供多种选择
• 采用磁珠纯化的实验方法，无需凝胶电泳
• 匹配多种自动化建库系统
• 多重建库的接头中包含index序列
• 经Illiumina 测序平台验证

多重测序

NEXTflex™ DNA Barcodes 、NEXTflex-96™ DNA Barcodes、NEXTflex-HT Barcodes 与NEXTflex™ Methyl-Seq 1 Kit配合使用，适用于多重建库。这些试剂盒包含indexed序列，改进了多重建库实验流程，样本起始量也可进行灵活的选择。自动化建库允许同时处理96种样本，多达768次反应，这些接头分别有6、12、24、48、96和384重这几种套装。该实验方法可有效的减少实验耗时，获得稳定的实验数据。NEXTflex™ and NEXTflex-96™ DNA Barcodes可用于单端测序、双端测序和多重测序。

产品列表：

NEXTflex Methyl-Seq 1 Kit Protocol （option-1）

NEXTflex Methyl-Seq 1 Kit Protocol （option-2）

NEXTflex™ Methyl-Seq Kit 1于Hiseq测序结果

四种甲基化组测序中，使用MeDIP 和MeCAP两种方法富集甲基化片段，较高的基因组覆盖率使检测到的甲基化胞嘧啶达到87-94%。使用两种不同方法进行DNA甲基化检测时，与体细胞相比，多功能干细胞的覆盖率有很大的不同。
 

KIT CONTENTS

• NEXTFLEX® Methyl End Repair Buffer Mix
• NEXTFLEX® Methyl End Repair Enzyme Mix
• NEXTFLEX® Methyl Adenylation Mix
• NEXTFLEX® Methyl Ligation Mix
• NEXTFLEX® DNA Adapter (25 µM)
• NEXTFLEX® Primer Mix (12.5 µM)
• NEXTFLEX® Methyl PCR Master Mix
• Nuclease-free Water
• Resuspension Buffer

REQUIRED  MATERIALS NOT PROVIDED

• 1 µg of fragmented genomic DNA in up to 40 µL nuclease-free water.
• NEXTFLEX® DNA Barcodes – 6 / 12 / 24 / 48 (Cat # 514101, 514102, 514103, 514104) or NEXTFLEX-96™ DNA Barcodes (Cat # 514106)
• Methylated DNA Enrichment Kit
• Methylated DNA IP Kit (Zymo Research Corp., Cat. # D5101) or
• MethylMiner™ Methylated DNA Enrichment Kit (Life Technologies, Cat. # ME10025)
• Ethanol 100% (room temperature)
• Ethanol 80% (room temperature)
• 96 well PCR Plate Non-skirted (Phenix Research, Cat # MPS-499) / or / similar
• 96 well Library Storage and Pooling Plate (Fisher Scientific, Cat # AB-0765) / or / similar
• Adhesive PCR Plate Seal (BioRad, Cat # MSB1001)
• Agencourt AMPure XP 5 mL (Beckman Coulter Genomics, Cat # A63880)
• Magnetic Stand -96 (Ambion, Cat # AM10027) / or / similar
• Heat block
• Thermocycler
• 2, 10, 20, 200 and 1000 L pipettes / multichannel pipettes
• Nuclease-free barrier pipette tips
• Microcentrifuge
• 1.5 mL nuclease-free microcentrifuge tubes
• Low melt agarose such as Low Gelling Temperature Agarose with a melt point of 65ºC (Boston Bioproducts, Cat # P-730)
• 1X TAE buffer
• Clean razor or scalpel
• SYBR Gold (Invitrogen, Cat # S11494)
• UV transilluminator or gel documentation instrument
• Gel electrophoresis apparatus
• Electrophoresis power supply
• Vortex

NEXTflex Methyl-Seq 1 Kit 部分引用文献

Winans, B., et al. (2015) Linking the Aryl Hydrocarbon Receptor with Altered DNA Methylation Patterns and Developmentally Induced Aberrant Antiviral CD8+ T Cell Responses. The Journal of Immunology.doi: 10.4049/jimmunol.1402044