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猪圆环病毒3型抗体检测试剂盒
AsurDx^TM Porcine Circovirus 3 (PCV-3) Antibody Test Kit
10086-02/05

一，概述
试剂盒用于检测猪血清中圆环病毒3型（PCV3）抗体。试剂盒原理是基于间接ELISA方法，酶标板上已经包被PCV3抗原，添加样品后，样品内的抗体能与板上包被抗原特异性结合形成抗原抗体复合物，并与后面加入的酶标二抗结合，二抗上的酶再催化底物显色，显色深度与样品中的抗体含量成正相关。
 
二，试剂盒规格及组分
试剂盒有效期为一年。

试剂盒组分	10086-02	10086-05	储存温度
抗原包被板PCV3 antigen-Coated Plate	2*96	5*96	4°C
阳性对照（红盖）PCV3 Positive Control	0.2mL	0.5mL	4°C
阴性对照（白盖）PCV3 Negative Control	0.2mL	0.5mL	4°C
酶标二抗HRP-Conjugated Antibody Solution	24mL	58mL	4°C
10X稀释液10X Diluent Solution	12mL	28mL	4°C
20X洗板液  20X Wash Solution	56mL	120mL	4°C
TMB底物 TMB Substrate	24mL	58mL	4°C
终止液 Stop Solution	24mL	58mL	4°C
PCV3检测液PCV3 Assay Diluent 红色液	24mL	55mL	4°C

备注：如果试剂盒超过一个月不使用建议阴阳性对照和酶标二抗-20°C储存。
三，试剂以及样品制备
1X稀释液：用9体积的蒸馏水稀释1体积的10X稀释液，得到1X稀释液。
1X洗板液：用19体积的蒸馏水稀释1体积的20X洗板液，得到1X洗板液。
样品血清预稀释：在血清稀释板上使用1X稀释液将样品血清稀释10倍，例如将20uL的血清加入到180uL的1X稀释液中混匀，备用。
四，实验操作

试剂	每孔用量
PCV3检测液PCV3 Assay Diluent	90 ul
样品/对照	10 ul
酶标二抗	100 ul
1X洗板液	2 ml
底物	100 ul
终止液	100 ul

1. 实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出回复室温；
2. 设置好对照及样品在抗原包被板的位置，所有孔中加入90ulPCV3检测液（PCV3 Assay Diluent）；
3. 加入10ul的阳性对照到抗原包被板两个孔中；
4. 加入10ul的阴性对照到抗原包被板的另外两个孔中；（强烈建议将阴性和阳性对照血清分隔加入，例如左上方加阳性对照，右下方加阴性对照）
5. 其他孔加入10ul预稀释的血清样品（已经预稀释了1:5）.
6. 轻微振荡1分钟；
7. 封板，37°C孵育30分钟；（封板，避光）
8. 弃去板中的液体；
9. 每孔加入250 uL洗涤液洗板5次，最后一次请把板孔拍干；
10. 每孔加入100uL 酶标二抗，封板，37°C孵育30分钟；（封板，避光）
11. 弃去板中的液体；每孔加入250uL洗涤液洗板5次，最后一次请把板孔拍干；
12. 每孔加入100uL的TMB底物，室温下暗处孵育15分钟；
13. 每孔加入100uL终止液，然后酶标仪450nm读数；
 
五，结果判断
样品PP值=（样品OD值÷阳性对照OD值）*100
有效性：阴性对照的PP值必须小于40%，阳性对照OD值的平均值必须≥0.5
血清
阴性：样品的PP值小于40%，样品血清中抗体阴性
阳性：样品的PP值大于40%，样品血清中抗体阳性