产品描述

Human T-Activator CD3/CD28磁珠提供了一种不需要抗原呈递细胞和抗原就能激活和扩增调节T细胞的简单的方法。通过在磁珠上偶联抗CD3和抗CD28单克隆抗体，就能提供调节T细胞激活和扩增需要的初级和协同刺激信号。

Human T-Activator CD3/CD28适用于人T细胞的分离、激活和扩增，可用于CAR-T等多种T细胞培养技术的应用。

产品信息

使用方法

1.Human T-Activator CD3/CD28磁珠的清洗

（1）在离心管里重悬磁珠（涡旋超过30s，或者颠倒混匀5min）。

（2）将确定体积的磁珠转移到离心管中。

（3）加入等体积的PBS缓冲液(含1%HSA)，若磁珠体积低于1mL，则加入1mL PBS缓冲液(含1%HSA)，进行重悬。

（4）把离心管放在磁力架（磁珠专用）上1min，随后弃去上清；

（5）将离心管从磁力架（磁珠专用）上转移下来，用相同体积的PBS缓冲液(含1%HSA)重悬磁珠（第2步初体积的磁珠）。

2.磁珠分离和扩增CD3+的T细胞

（1）对于Ficoll分离的PBMC，将细胞轻柔地重悬于PBS缓冲液(含1%HSA)中，并调节细胞密度为2~5×107个/mL。（此处注意，总的细胞数量不要超过2×108个。）

（2）将磁珠和细胞按照3:1的比例混合(如果需要活化的细胞是纯T细胞，那么磁珠与细胞的比例调整为1:1)。

（3）将样品置于转速100~200rpm/min的摇床上，在4℃~25℃条件下孵育30min，在每次的试验中需要在4℃~25℃范围内优化适的孵育条件。

（4）用无血清培养基或者PBS缓冲液(含1%HSA)稀释磁珠和细胞的混合物，来保证磁力架（磁珠专用）的分选体积。同时将离心管放在磁力架（磁珠专用）上1~2min。

（5）弃上清，将含有1000 IU/mL IL-2的完全培养基重悬磁珠和细胞的混合物，并调整细胞密度为0.5×106个/mL~1×106个/mL。

（6）将细胞悬液置于培养容器中，调节细胞密度为0.5~1×106/mL，随后将培养容器置于37℃，5%CO2的培养箱中，培养7天。

3.细胞计数和培养体系的扩增：

（1）细胞扩增后期，定期轻轻地吹打培养容器中的细胞悬液，以便将磁珠和细胞分离。吹打过程要确保能够分散所有可见的磁珠与细胞的混合物。

（2）当CD3+ T＞1×106个/mL，补加含有IL-2的T细胞完全培养基稀释细胞，调整细胞密度大约为0.5×105个/mL。

（3）在培养的后几天（9~14天），进行细胞计数，并用磁铁或磁力架去除磁珠。

注意事项

1.由于单核细胞在37℃能够快速的吞噬磁珠，因此就降低了所能够接触到T细胞磁珠的绝对数量，进而降低了T细胞活化和扩增能力。

2.培养过程中，可以每天都进行细胞计数。同时通过流式细胞术对T细胞的纯度、表型、活化状态进行追踪。同时，收集培养上清进一步对T细胞活化状态进行细胞因子分泌的检测。

3.若需要转染，一般在细胞活化的第3~4天，细胞活率高于90%再进行转染。