生化试剂

鬼笔环肽-iFluor™ 594 Phalloidin-iFluor

基本信息
产品名称:
鬼笔环肽-iFluor™ 594 Phalloidin-iFluor
英文名称:
国产/进口:
国产
产地/品牌:
warbio沃博生物
型号:
300T
参考报价:
2207.04
总点击数:
190
更新日期:
2025-05-22
产品类别:

性能参数
产品信息
 
货号 名称 规格 价格/元
LX8801 Phalloidin-iFluor™ 594 Conjugate鬼笔环肽-iFluor™ 594 300T 2006.4









产品简介
鬼笔环肽(Phalloidin)的结合阻止丝状肌动蛋白(微丝)的解离,稳定微丝结构,从而破坏微丝的聚合-去聚合的动态平衡。此特性使得肌动蛋白聚合发生的临界浓度(CC)降至<1µg/mL,因此,可用作一种聚合促进剂。此外,鬼笔环肽还可抑制F-actin的ATP水解活性。
本品为鬼笔环肽-iFluor 594标记探针会选择性地结合F-肌动蛋白。以纳摩尔浓度使用,鬼笔环肽衍生物是方便的探针,用于标记,鉴定和定量甲醛固定和透化组织切片中的F-肌动蛋白,细胞培养物或无细胞实验。肌动蛋白是一种球状的,大约42kDa的蛋白质,几乎存在于所有真核细胞中。 它也是最高度保守的蛋白质之一,与藻类和人类不同的物种相差不超过20%。 肌动蛋白是细胞中两种细丝的单体亚基:微丝,细胞骨架的三个主要组分之一,以及微丝,是肌细胞中收缩装置的一部分。 因此,肌动蛋白参与许多重要的细胞过程,包括肌肉收缩,细胞运动,细胞分裂和胞质分裂,囊泡和细胞器运动,细胞信号传导,以及细胞连接和细胞形状的建立和维持。
本品以1000×储存液形式(溶于DMSO)提供,按照100µl/孔(96孔板),总共可做300T。
注意事项:   
鬼笔环肽  的分子量小,很容易通过细胞,不需要对细胞进行冷丙酮和TRITON X-100处理。毒性较大,戴上手套操作。
有几种方法都能用来染色组织细胞培养物内的肌动蛋白丝(F-actin)染色,其中,固定步骤在获得可信且具代表性的细胞F-actin分布情况中至关重要。固定步骤基于实验自身需求来选择。多聚甲醛或戊二醛都能得到优秀的F-actin染色和良好的板状伪足维持保存。
一、实验材料准备
1.1 iFluor 594 Phalloidin(货号 LX8801)
1.2 1×PBS Buffer(pH 7.4), for Cell Culture(货号 SH30256.01)
1.3 固定液(溶于PBS的4%多聚甲醛,pH 7.0)
1.4 破膜液(溶于PBS的0.5% Triton X-100)
1.5 (可选)抗荧光淬灭剂
1.6 (可选)即用型PI染色液(货号 4209)
1.7 (可选)BSA, Standard Grade(货号 J8660)
1.8 黑框/透明底的96孔细胞培养板
二、染色工作液准备
2.1 于实验前将低温保存的iFluor 594Phalloidin置于室温回温至少20min,低速离心后才开瓶。第一次使用请将本品按照单次用量进行分装,置于-20℃避光保存,一年稳定。
2.2 本品以1000×DMSO储存液形式提供。开始实验前,使用1×PBS Buffer(pH 7.4)将其稀释到1×染色工作液(比如1µl储存液加入1ml PBS Buffer),用枪吹匀即可。
【注①】:以96孔板为检测体系,按照100µl/孔来计算,准备足量的染色工作液;也可对细胞爬片进行染色,但需调整染色工作液的用量,以能覆盖住细胞为准。
【注②】:最佳的工作浓度和孵育时间取决于特定的应用。根据特定的细胞类型和/或细胞/组织对探针的通透性来调整合适的染色条件。
【注③】:可使用含1% BSA的PBS Buffer稀释储存液,能够降低非特异背景染色,也能最小化鬼笔环肽粘附到管壁的可能性。
【注④】:染色工作液现配现用,室温避光保存。
三、染色流程(以96孔板为例)
3.1 用黑框/透明底的96孔板进行细胞培养,使其贴壁生长达到70-80%的汇合度。
3.2 吸掉培养液,用37℃预热的1×PBS Buffer(pH 7.4)清洗细胞2次。
3.3 用溶于PBS的4%多聚甲醛固定细胞,室温固定10-30min。【注意】:固定过程中甲醇能破坏肌动蛋白,因此,固定液中最好避免接触任何甲醇。最好的固定液是无甲醇的甲醛。
3.4 用1×PBS Buffer清洗细胞2-3次,室温下30s/次。
3.5 用破膜缓冲液透化细胞,室温处理5min。
3.6 用1×PBS Buffer清洗细胞2-3次,室温下30s/次。
3.7 取100μl现配的iFluor 594Phalloidin染色工作液到每个孔内,室温避光孵育30-90min。
【注意】:若有需要,此时可加入即用型PI染色液或其他不同于iFluor 594荧光光谱的细胞核染色液。
3.8 用1×PBS Buffer清洗细胞2-3次,室温下30s/次。
3.9 加抗荧光淬灭剂(如Fluoromount-GTM)到孔内保护荧光。
3.10 荧光显微镜下观察染色结果,选择iFluor 594激发/发射滤片(Ex/Em=590/618nm)。若做细胞核染色,选择合适滤片,比如PI激发/发射滤片(Ex/Em=364/454nm)。
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