免疫学/诊断检测试剂

SpCas9

基本信息
产品名称:
SpCas9
英文名称:
SpCas9
国产/进口:
国产
产地/品牌:
中国
型号:
100 pmoL
参考报价:
600
总点击数:
343
更新日期:
2025-06-23

性能参数
Cas蛋白
产品描述

SpCas9是一种由crRNA和tracrRNA共同(或两者融合后形成的sgRNA)引导的DNA内切核酸酶,来源于S. pyogenes菌株。在靶标双链DNA存在PAM(5′-NGG-3′)的情况下,特异地剪切靶标双链DNA,使DNA双链断裂并生成平末端。PAM对于Cas9的识别和剪切都是必需的,其剪切位点位于目标序列(target sequence)内,离PAM区3个碱基。此外,在DNA PAMmer序列存在时,SpCas9也能特异地剪切单链DNA或RNA(详细信息请参考PMID: 24476820;PMID: 25274302)。此酶还可应用于体外靶标DNA的剪切、目的片段的克隆等实验(详细信息可参考PMID: 26323354) 。

 

产品优势

✽ 高纯度

✽ 高灵敏度

✽ 高特异性

 

实验案例

1.SpCas9的顺式剪切:本实验中使用小鼠来源的DNMT1基因的部分片段作为靶标,靶标双链DNA总长度为2.2 kb,实验中设计的sgRNA包含与DNMT1序列互补的spacer区。实验结果表明,SpCas9在sgRNA的引导下特异识别并剪切DNMT1序列,导致靶标DNA双链断裂,得到2段顺式剪切产物,片段大小分别为1.3 kb 和0.9 kb。

图1:SpCas9的顺式剪切活性

 

实验流程

1.顺式剪切实验

组分

体积

终浓度

10 × TOLO Buffer 3

2 μL

1 ×

10 μM SpCas9 Nuclease

0.5 μL

250 nM

10 μM sgRNA

0.5 μL

250 nM

1 μM Target dsDNA 

0.5 μL

25 nM

Nuclease-free water 

Up to 20 μL

 

◆ 若用核酸电泳来分析顺式剪切产物,对于20 μL顺式剪切应体系,推荐target DNA的使用量为100 ng~500 ng,且target DNA片段长度在300 bp~3 kb范围内。不同长度target DNA需要的Cas酶和sgRNA的量需要根据target DNA的摩尔量计算,建议保持Cas酶:sgRNA:target DNA的摩尔比为10:10:1,以尽量确保target DNA被剪切完全。

37℃反应30 min~1 h,85℃灭活5 min。核酸电泳分析顺式剪切产物。

 

产品组分

组分

32101-01 (100 pmol)

32101-03 (1,000 pmol)
 SpCas9 Nuclease (10 μM) a 100 pmol 1,000 pmol
 10 × TOLO Buffer 3 1 mL  1 mL
 Control Target DNA and sgRNA b  5 μL 5 μL

a. SpCas9 Nuclease 浓度为 10 μM,即 10 pmol/μL,100 pmol 规格的总体积为 10 μL,1,000 pmol 规格的总体积为 100 μL;

b. Control Target DNA and sgRNA 应保存于-80℃并避免反复冻融,必须在 6 个月内使用,使用时建议取 0.5 μL 至每 20 μL 反应体系。

 

保存条件

Control Target DNA and sgRNA 于-80℃储存,其余组分-20℃储存;≤ 0℃运输。

公司简介
南京沃博生物科技有限公司专注于生命科学和生物技术领域。
致力于为客户提供一系列高质量和有价格竞争力的产品,包括分子生物学、免疫学、生物化学和细胞生物学相关的试剂、试剂盒,
并提供一系列相关的技术服务。2015年,南京沃博生物科技有限公司正式成立.
自主生化试剂品牌warbio已经入驻多家高校平台,先后入驻南京大学,南京农业大学,东南大学,西湖大学,华南理工大学,北京师范大学,福建农林大学,北京库巴扎,天津基理,上海至采信息采购平台等公司秉持诚信经营,为科研工作者提供更好的产品。专业代理销售国内外生命科学领域的知名品牌以及warbio沃博生物常规生化试剂,公司长期以来与众多国内外知名厂家和多家专业代理销售公司保持密切联系、沟通与合作,拥有稳定、有效的产品供应渠道。公司长期以来以提供高质量的产品、实惠的价格和优质的服务赢得客户的好评,与多家高等院校、研究所、医院、制药企业等大型科研机构建立长期稳定的合作关系。
主要代理北京庄盟生物分子试剂,Abmart艾比玛特抗体,美国Phytoteche一级代理,美国AATBIO细胞染料,安普未来恒温扩增试剂盒,英国TwistDx公司RPA等温扩增试剂盒,美国GLPBIO抑制剂,Tolobio吐露港生物 ,药物发现一站式平台 陶术生物Topscience等国外知名生命科学产品试剂耗材。

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