细菌、真菌混合快检试剂盒
基本信息
产品名称：
细菌、真菌混合快检试剂盒
英文名称：
国产/进口：
国产
产地/品牌：
上海翼和/ Biowing
型号：
B&F01
参考报价：
销售商：
总点击数：
507
更新日期：
2025-06-19
产品类别：
性能参数
B&F01 100 Reactions/盒
【产品说明】
基于TaqMan探针荧光定量PCR原理的检测方案：选择细菌（生孢梭菌、枯草牙孢杆菌、铜绿假胞杆菌）和真菌（白色念珠菌和黑曲霉）基因中特异基因片段，分别设计引物和荧光探针，快速检测4种细菌和2种真菌的基因组DNA。
结合相关的样本前处理和DNA抽提方案，本试剂盒可以检测各类生物制品和细胞培养物中潜在的生孢梭菌、枯草牙孢杆菌、铜绿假胞杆菌、白色念珠菌和黑曲霉污染。
灵敏：配合推荐使用的核酸抽提方案，检测灵敏度达到10CFU/mL。
可靠：抽提加入内标核酸，全过程质量控制。
稳定：全程闭管操作，无交叉污染。
快捷：单管可同时检测6种菌种，检测效率高。
准确：样本设置3重复，避免假阴、阳性的出现。
【有效期】
规定储存条件下6个月。
-20 ℃取出后，可避光存放于4 ℃继续使用1周。
【产品组分】
表1 产品组分
注：
1、Bacterial&Fungus Positive Control含4种细菌DNA、2种真菌DNA和内标DNA。
【操作步骤】
1.样本制备
【注】：此时每个反应孔的体积为30μL
PCR 仪设置以 ABI 7500 为例，相对定量模式，选择
TaqMan 探针法：
注： 1、该程序为两阶段扩增法，如荧光定量PCR仪可以两阶段收集荧光，按照正常Ct值判断结果；如果只能最后一步收集荧光，需要在原数据的基础上加15个Ct值。
以ABI 7500 为例，扩增曲线选择 log 法，基线设置1~2 个循环。建议用 log 法扩增曲线保证结果稳定可靠。
（1）内参(CY5)阈值设定：以阳性性对照定内参扩增曲线阈值，将内参的CT 值定为 29±2。
（2）细菌 (FAM)阈值设定：以阳性对照定细菌扩增曲线阈值，将细菌(FAM)的CT值定为 29±2。
（3）真菌(HEX)阈值设定：以阳性对照定细菌扩增曲线阈值，将真菌(HEX)的CT值定为 29±2。
【实验质量控制】：
如果阳性对照管的细菌(FAM)和真菌(HEX)Ct 值均>31，但阳性对照管及阴性对照管的内参(CY5)Ct 值正常，表明阳性对照模板有降解。
如果样品前处理阴性（CY5)Ct 值>32，阳性对照管的内参(CY5)Ct 值>31 ，表明内参DNA存在降解或PCR体系扩增效率下降。
【结果判读】
根据细菌(FAM) Ct 值、真菌(HEX) Ct 值、内标(CY5) Ct 值判定，具体标准如下：
注：结果判读
要求每个检测样品做3重复，如果3复孔中，两重复为阳性，则判读为阳性。
建议做样本前处理阴性，可以质控整个抽提过程。
如果待测样本反应中仅有FAM和CY5通道有扩增，表明存在细菌污染，若要进一步确认是何种细菌污染，推荐使用细菌检测试剂盒（货号：BD01和BD02）。
如果待测样本反应中仅有HEX和CY5通道有扩增，表明存在真菌污染，若要进一步确认是何种真菌污染，推荐使用细菌检测试剂盒（货号：FD01）。
注：检测结果异常时
样品前处理阴性：内参Ct值过大，表明抽提效率低；细菌和真菌检测通道Ct值小于37，可能前处理抽提过程存在污染。
qPCR阴性：细菌检测通道 Ct 值小于37，操作过程存在污染。
样本前处理处理阴性质控 PCR阴性质控内参差±1个 Ct 值属于正常现象。
【 PCR过程注意事项】
由于 PCR 反应非常灵敏，实验操作中应注意以下事项，以免发生DNA 污染：
1、试剂盒开启后，阳性对照应与试剂 Mix、阴性对照分开存放。
2、每个组分在使用前都应先低速离心后小心开启。使用时请上下轻柔颠倒十次混匀，避免起泡，并低速短暂离心后使用。
3、要求核酸抽提和qPCR过程都符合无菌操作规范。
4、建议自备转运盒，用于将配制分装好的Mix从配置Mix超净工作台转运到加样超净工作台。
5、建议在 qPCR 反应板上阳性对照的排布应远离待测样本和阴性对照。
6、建议 qPCR 配置与分装在一个无菌操作台，样本的加样在另外一个无菌操作台。
7、建议使用不同的移液器添加阳性对照与待测样本、阴性对照，并使用带滤芯的枪
头进行加样。
8、应按照先加阴性，再加样本，最后加阳性的顺序加样。且阳性用专门的加样器。建议阳性在专门的无菌操作台加样。
9、qPCR 反应板封膜或盖盖子时须反复压紧。
10、上机扩增前，反应管短时低速离心，将管壁液体收集至管底。
11、盖上反应管盖子或者贴上光学膜后，为避免影响荧光信号读取，请注意不要在管盖或者膜上做标记，或者用刮板反复摩擦。
【产品说明】
基于TaqMan探针荧光定量PCR原理的检测方案：选择细菌（生孢梭菌、枯草牙孢杆菌、铜绿假胞杆菌）和真菌（白色念珠菌和黑曲霉）基因中特异基因片段，分别设计引物和荧光探针，快速检测4种细菌和2种真菌的基因组DNA。
结合相关的样本前处理和DNA抽提方案，本试剂盒可以检测各类生物制品和细胞培养物中潜在的生孢梭菌、枯草牙孢杆菌、铜绿假胞杆菌、白色念珠菌和黑曲霉污染。
灵敏：配合推荐使用的核酸抽提方案，检测灵敏度达到10CFU/mL。
可靠：抽提加入内标核酸，全过程质量控制。
稳定：全程闭管操作，无交叉污染。
快捷：单管可同时检测6种菌种，检测效率高。
准确：样本设置3重复，避免假阴、阳性的出现。
【有效期】
规定储存条件下6个月。
-20 ℃取出后，可避光存放于4 ℃继续使用1周。
【产品组分】
表1 产品组分
注：
1、Bacterial&Fungus Positive Control含4种细菌DNA、2种真菌DNA和内标DNA。
- Internal Standard含有内标DNA。
【操作步骤】
1.样本制备
- 样本的标准制备方案：请配合使用高效无微生物污染的DNA抽提试剂盒提取样本DNA。整个过程需要遵守无菌操作规范。本公司目前推荐抽提试剂盒见附录2。直接取20 µL待测样本DNA，作为模板进行 qPCR 反应。
- 前处理阴性样本准备方案：将RNase Free Water当成样本，加入内部质控（Internal standard），进行核酸抽提。
- 根据所要检测样品的数量，计算所需反应孔数，每个样本做3个重复孔。
- 根据反应孔数计算所需的 Mix 总量（需有1孔的加样损失量）：
- 各试剂放室温融化，并根据下表所示准备 qPCR Mix：
【注】：此时每个反应孔的体积为30μL
PCR 仪设置以 ABI 7500 为例，相对定量模式，选择
TaqMan 探针法：
注： 1、该程序为两阶段扩增法，如荧光定量PCR仪可以两阶段收集荧光，按照正常Ct值判断结果；如果只能最后一步收集荧光，需要在原数据的基础上加15个Ct值。
- ROX设置是以7500为例，也存在例外，例如StepOne。
以ABI 7500 为例，扩增曲线选择 log 法，基线设置1~2 个循环。建议用 log 法扩增曲线保证结果稳定可靠。
（1）内参(CY5)阈值设定：以阳性性对照定内参扩增曲线阈值，将内参的CT 值定为 29±2。
（2）细菌 (FAM)阈值设定：以阳性对照定细菌扩增曲线阈值，将细菌(FAM)的CT值定为 29±2。
（3）真菌(HEX)阈值设定：以阳性对照定细菌扩增曲线阈值，将真菌(HEX)的CT值定为 29±2。
【实验质量控制】：
如果阳性对照管的细菌(FAM)和真菌(HEX)Ct 值均>31，但阳性对照管及阴性对照管的内参(CY5)Ct 值正常，表明阳性对照模板有降解。
如果样品前处理阴性（CY5)Ct 值>32，阳性对照管的内参(CY5)Ct 值>31 ，表明内参DNA存在降解或PCR体系扩增效率下降。
【结果判读】
根据细菌(FAM) Ct 值、真菌(HEX) Ct 值、内标(CY5) Ct 值判定，具体标准如下：
注：结果判读
要求每个检测样品做3重复，如果3复孔中，两重复为阳性，则判读为阳性。
建议做样本前处理阴性，可以质控整个抽提过程。
如果待测样本反应中仅有FAM和CY5通道有扩增，表明存在细菌污染，若要进一步确认是何种细菌污染，推荐使用细菌检测试剂盒（货号：BD01和BD02）。
如果待测样本反应中仅有HEX和CY5通道有扩增，表明存在真菌污染，若要进一步确认是何种真菌污染，推荐使用细菌检测试剂盒（货号：FD01）。
注：检测结果异常时
样品前处理阴性：内参Ct值过大，表明抽提效率低；细菌和真菌检测通道Ct值小于37，可能前处理抽提过程存在污染。
qPCR阴性：细菌检测通道 Ct 值小于37，操作过程存在污染。
样本前处理处理阴性质控 PCR阴性质控内参差±1个 Ct 值属于正常现象。
【 PCR过程注意事项】
由于 PCR 反应非常灵敏，实验操作中应注意以下事项，以免发生DNA 污染：
1、试剂盒开启后，阳性对照应与试剂 Mix、阴性对照分开存放。
2、每个组分在使用前都应先低速离心后小心开启。使用时请上下轻柔颠倒十次混匀，避免起泡，并低速短暂离心后使用。
3、要求核酸抽提和qPCR过程都符合无菌操作规范。
4、建议自备转运盒，用于将配制分装好的Mix从配置Mix超净工作台转运到加样超净工作台。
5、建议在 qPCR 反应板上阳性对照的排布应远离待测样本和阴性对照。
6、建议 qPCR 配置与分装在一个无菌操作台，样本的加样在另外一个无菌操作台。
7、建议使用不同的移液器添加阳性对照与待测样本、阴性对照，并使用带滤芯的枪
头进行加样。
8、应按照先加阴性，再加样本，最后加阳性的顺序加样。且阳性用专门的加样器。建议阳性在专门的无菌操作台加样。
9、qPCR 反应板封膜或盖盖子时须反复压紧。
10、上机扩增前，反应管短时低速离心，将管壁液体收集至管底。
11、盖上反应管盖子或者贴上光学膜后，为避免影响荧光信号读取，请注意不要在管盖或者膜上做标记，或者用刮板反复摩擦。
公司简介
上海翼和应用生物技术有限公司是上海市高新技术企业，上海市遗传学会理事单位，至今已有十九年历史。公司具备ISO9001与CMA资质，上海翼和专家团队富有开创精神，朝气蓬勃，秉承“专业、协作、进取”的企业精神，为国内科研工作者和生物医药企业提供细胞质控类、健康检测类与科研技术类的服务与产品。
翼和专注为工业客户提供：细胞STR鉴定，种属鉴定，PDX模型质控，支原体检测服务/试剂盒，端粒长度检测/试剂盒，端粒酶活性检测/试剂盒等服务及产品。为科研客户提供：实验大小鼠遗传背景鉴定，线粒体拷贝数变异检测，超高重SNP分型检测，目标区间重测序，目标区域甲基化测序等服务。
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