人胚胎祖细胞株EN55克隆来源于已注册的亲代人胚胎干细胞系H9(WA09)(West et al, 2008)。它表达基因GATA2,类整合素金属蛋白酶凝血酶敏感素序列-2(ADAMTSL2), FGF14, 血管生成素2(ANGPT2), 和T-box 1(TBX1)。这株细胞不表达HOX同源基因。在分化试剂ES-K49分化下,这株细胞向上调控CYP26A1的表达(其参与RA类物质的羟基化反应,包括4-OH-RA, 4-oxo-RA和18-OH-RA),同时也向上调控SCUBE2的表达,其参与Sonic Hedgehog(SHH)和SHH受体PTCH1(Patched-1)作用,从而增强SHH信号系统的活性(Tsai et al,2009)。
阳性mRNA标记:GATA2,ADAMTSL2, FGF14, ANGPT2,TBX1
产品信息
来源: 人胚胎祖细胞株EN55克隆来源于已在NIH注册的亲代人胚胎干细胞系H9(WA09)(West,M.D.et al,2008)
应用范围:干细胞科研,
细胞数:每管含有>500,000细胞, 冷冻保存在1mL含10%DMSO的胎牛血清(FBS)中。
推荐生长培养基:ES-M15
推荐培养环境:细胞应培养在有0.1%明胶涂层的组织培养级别的聚苯乙烯的培养皿上。快速融解,随后用培养基缓慢稀释,细胞最初的接种密度应该是大约20,000细胞/cm2。细胞应培养在37℃的5%COf和5%O2可增湿培养箱中,培养基每周至少更换两次。对常规的培养,在细胞长汇合后,按1:3的比例进行传代。
注意:生长汇合后超过两天,不传代将会导致细胞的终末分化。
可用分化培养基:
分化培养基:ES-K21
细胞群体倍增时间:大约50个小时
细胞群体倍增:细胞株EN55在12代出售(最初从长汇合1.9cm2细胞培养皿中分离出的克隆设为P1),以1.9cm2细胞培养皿记,其对应大约13.5倍增,以原始的培养记,其对应大约31.5倍增。在体外,这株细胞有有限的细胞周期,在大约70个细胞群体倍增时停止生长。在正确的使用情况下,这株细胞可以扩增至少10个群体倍增。
质量控制:
无菌试验:细菌,真菌阴性,
冷冻复苏测试结果:>50% 细胞活性,>25%的附着性,具有生长汇合性,保持原始的细胞形态。
分析证明:请询要
使用限制:这些细胞只能做研究使用。不能人用,也不能以商业的目的使用。获得该细胞株后,用户确保正确使用和操作。
技术支持:请联系上海健耕医药有限公司(邮箱:helps@genext.com.cn 或者热线电话:400-6988-806)。
参考:
Tsai MT, Cheng CJ, Lin YC, Chen CC, Wu AR, Wu MT, Hsu CC, Yang RB. 2009. Isolation and characterization of a secreted, cell-surface glycoprotein SCUBE2 from humans. Biochem J. 29;422(1):119-28.
West, M.D., Sargent, R.G., Long, J., Brown, C., Chu, J-S., Kessler, S., Derugin, N., Sampathkumar, J., Burrows, C., Vaziri, H., Williams, R., Chapman, K.B., Larocca, D., Loring, J.F., and Murai, J. 2008. The ACTCellerate Initiative: large-scale combinatorial cloning of novel human embryonic stem cell derivatives. Reg. Med. 3(3): 287-308.