APOE 基因相关位点检测试剂盒
【产品规格及货号】
HRAP-50；50反应/盒
【产品优势】方便：操作简单，可直扩检测。
灵敏：微量核酸即可检测。
特异性：不与其他类似物产生交叉反应。
【运输及保存条件】低温冷冻运输，-20℃保存，其中保存液和裂解液4℃保存，反复冻融次数低于3次，有效期 1年。
【自备仪器】
SLAN96或其他四色荧光定量PCR仪、离心机。
【产品组分】
A:
B:
1. 试剂的复溶：
检测液和阳性质控先12000 rpm离心5 min，再分别用75 μL/管和50 μL/管 RNase Free Water复溶，混匀1min，再瞬离。
2. 样本制备（自备）
A 样本的标准制备方案：请使用高效DNA 提取试剂盒提取人口腔黏膜、全血或新鲜组织样本的DNA。推荐使用无微生物污染级别的核酸提取试剂盒。
B 样本的简易快速制备方案：可用于人口腔拭子，样本制备步骤如下。
（1）采集口腔拭子（1根），存放于口腔拭子保存液中。保存液存放于1.5 mL EP管中，管内含0.5 mL保存液。
（2）将含拭子的保存液EP管震荡20 s，然后低速(2000 rpm)瞬离（5 s），将管盖上的液体离心下去。
（3）打开盖子，枪头插到底部，吸取50 μL溶液。转移到200 μL的EP管中。
（4）将上述200 μL EP管中加入5 μL裂解液，吹打混匀10次。
（5）将EP管上PCR仪，95 ℃10 min。
（3）2000 rpm离心2分钟，将各类细胞碎片离心到管底。打开盖子，取4 μL上清作为模板(在液面取样，吸头不要插到管底)，加入PCR体系。
1. qPCR 反应液的准备
（1）根据所要检测样品的数量，计算所需反应孔数，每个样本做单复孔。
反应孔数=1个阳性PCR质控+1个阴性PCR质控+样本数
（2）根据反应孔数计算所需的qPCR Mix 总量（需有1孔的加样损失量）：
Mix =（反应孔数+1）×16 μL
（3）各试剂放室温融化，并根据下表所示准备 qPCR Mix：
表2 qPCR Mix的配制
qPCR 反应体系及条件（反应体系以20 µL为例）：
加样（1）震荡混匀 qPCR Mix，低速离心，将管盖残留液体收集至管底。
（2）向每孔反应管中分装 16 μL qPCR Mix。
（3）向已分装过 qPCR Mix 的反应管中加入15 μL石蜡油。
（4）向反应管中穿过石蜡油层加样，3000 rpm 瞬离5 s，加样示例如下：
表 3 加样示例
PCR 仪设置以 SLAN96为例，溶解曲线模式，通道选择FAM和ROX：
【结果判读】三个位点的基因型判读如下所示：
注：阴性对照应无熔解峰；温度偏离峰±1℃属正常现象。
【参考文献】
［1］李京等.ApoE 基因多态性与中国人群 MS 相关性 Meta 分析［J］中国公共卫生，2013.29(9):1336-1340
［2］沙海滨，贺圣文． 痛风相关因素及其易感基因研究进展［J］.中国公共卫生，2009,25（5）:629-631
［3］Zannis VI，Breslow JL，Sangialomo TR. Characterization of the major apolipoproteins secreted by two human hepatoma cell lines ［J］.Biochemistry，1981，20( 25) : 7089-7096．
翼和专注为工业客户提供：细胞STR鉴定，种属鉴定，PDX模型质控，支原体检测服务/试剂盒，端粒长度检测/试剂盒，端粒酶活性检测/试剂盒等服务及产品。为科研客户提供：实验大小鼠遗传背景鉴定，线粒体拷贝数变异检测，超高重SNP分型检测，目标区间重测序，目标区域甲基化测序等服务。
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