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BI-78D3

MCE 国际站：BI-78D3

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-10366

CAS：883065-90-5

纯度：99.85%

存储条件：Powder -20°C 3 years 4°C 2 years In solvent -80°C 2 years -20°C 1 year

运输条件：美国大陆的室温；其他地方可能有所不同。

产品活性：BI-78D3 是一种底物竞争性的 JNK 抑制剂，抑制 JNK 激酶活性，IC50 为 280 nM。

生物活性：BI-78D3 作为 JNK 的底物竞争性抑制剂，抑制 JNK 激酶活性 (IC₅₀=280 nM)。 IC50 和目标：IC50：280 nM (JNK)^[1] 体外： BI-78D3，剂量依赖性地抑制 JNK 的磷酸化体外和细胞内的底物。 BI-78D3 能够与 JIP1 的 D 结构域（氨基酸 153-163；pepJIP1）竞争结合 JNK1 (IC₅₀=500 nM)。使用相同的体外 LanthaScreen 激酶测定和相同的 ATF2 底物，发现 BI-78D3 的活性比 p38α 低 100 倍，p38α 是与 JNK 具有高度结构相似性的 MAPK 家族成员，并且对 mTOR 和 PI3 完全无活性-激酶（α-同种型），两种不相关的蛋白激酶。此外，Lineweaver-Burk 分析清楚地表明，BI-78D3 与 ATF2 竞争结合 JNK1，表观 K_i 值为 200 nM。为了在复杂的细胞环境中分析 BI-78D3 的特性，使用了基于细胞的 LanthaScreen 激酶测定。在此测定中，BI-78D3 能够抑制细胞中 TNF-α 刺激的 c-Jun 磷酸化 (EC₅₀=12.4 μM)^[1]。 体内实验：使用 JNK1^-/- 的研究证实了 ConA 诱导的肝衰竭、TNF 受体信号和 JNK 功能之间的联系和 JNK2^-/- 小鼠。对于此分析，胰岛素不敏感小鼠仅在注射胰岛素前 30 分钟注射一次 25 mg/kg BI-78D3。然后测量胰岛素对血糖水平的影响。与载体对照相比，BI-78D3 导致血糖水平在统计学上显着降低。因此，BI-78D3 消除 ConA 诱导的肝损伤和恢复胰岛素敏感性的能力与其提出的作为有效 JNK 抑制剂的功能一致。液相色谱/质谱生物利用度分析表明，BI-78D3 具有良好的微粒体和血浆稳定性（T_1/2=54 min）^[1]。

体外：BI-78D3 剂量依赖性地抑制体外和细胞内 JNK 底物的磷酸化。BI-78D3 能够与 JIP1 的 D 结构域（氨基酸 153-163；pepJIP1）竞争 JNK1 结合（IC50=500 nM）。使用相同的体外 LanthaScreen 激酶测定和相同的 ATF2 底物，发现 BI-78D3 的活性比 p38α 低 100 倍，p38α 是 MAPK 家族的成员，与 JNK 具有高度结构相似性，并且对 mTOR 和 PI3-激酶（α-异构体）完全无效，这两种蛋白激酶都是不相关的。此外，Lineweaver-Burk 分析清楚地表明，BI-78D3 与 ATF2 竞争结合 JNK1，表观 Ki 值为 200 nM。为了在复杂的细胞环境中分析 BI-78D3 的特性，我们使用了基于细胞的 LanthaScreen 激酶测定法。在该测定法中，BI-78D3 能够抑制 TNF-α 刺激的细胞中 c-Jun 磷酸化 (EC50=12.4 μM)[1]。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

体内：使用 JNK1-/- 和 JNK2-/- 小鼠的研究已证实 ConA 诱导的肝功能衰竭、TNF 受体信号传导和 JNK 功能之间的联系。为了进行此分析，在注射胰岛素前 30 分钟，仅向胰岛素不敏感小鼠注射一次 25 mg/kg BI-78D3。然后测量胰岛素对血糖水平的影响。与载体对照相比，BI-78D3 可显著降低血糖水平。因此，BI-78D3 消除 ConA 诱导的肝损伤并恢复胰岛素敏感性的能力与其作为有效 JNK 抑制剂的预期功能一致。液相色谱/质谱生物利用度分析表明，BI-78D3 具有良好的微粒体和血浆稳定性（T1/2=54 分钟）[1]。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

细胞实验：小鼠[1] 将 ConA 和 BI-78D3 以 10 mg/kg 的剂量静脉注射到 6 至 8 周龄雄性 BL/6 小鼠体内。对于部分肝切除术，用异氟烷麻醉小鼠，然后进行中腹剖腹手术，随后切除左侧叶和中叶。杀死动物，通过心脏穿刺采集血液，然后手术切除肝脏。分离血清并分析丙氨酸氨基转移酶水平[1]。根据给药前三天适应的血糖水平，将 11 周龄雄性 BKS.Cg-+Leprdb/+Leprdb/OlaHsd db/db 小鼠随机分组。使用手持式血糖仪读取血糖（小鼠在腹腔注射（ip）25 mg/kg BI-78D3 前禁食 6 小时。注射测试品 30 分钟后，通过腹腔注射注射牛胰岛素（I-0516，0.75 mg/kg）。在指定时间点采集血液样本，并按所述测量血糖水平。注射测试品 3 小时后恢复食物[1]。MCE 尚未独立确认这些方法的准确性。它们仅供参考。

激酶实验：细胞激酶试验用于测定 c-Jun 和 ATF2 磷酸化，使用 LanthaScreen c-Jun (1-79) HeLa 和 LanthaScreen ATF2 (19-106) A549 细胞系，分别稳定表达 GFP-c-Jun 1-79 和 GFP-ATF2 19-106。磷酸化通过测量铽标记磷酸特异性抗体和 GFP 融合蛋白之间的时间分辨 FRET (TR-FRET) 来确定。将细胞接种于经白色组织培养处理的 384 孔板中，密度为每孔 10,000 个细胞，培养基为 32 μl（补充有 1% 活性炭/葡聚糖处理的 FBS、100 U/mL 青霉素和 100 μg/mL 链霉素、0.1 mM 非必需氨基酸、1 mM 丙酮酸钠、25 mM Hepes、pH 7.3，不含酚红）。过夜孵育后，用 BI-78D3（0.001、0.01、0.1、1、10 和 100 μM）预处理细胞 60 分钟，然后用 2 ng/mL TNF-α 刺激 30 分钟，TNF-α 可刺激 JNK 和 p38。然后吸去培养基，加入 20 μL 裂解缓冲液（20 mM TrisHCl，pH 7.6，5 mM EDTA，1% Nonidet P-40 替代品，5 mM NaF，150 mM NaCl，以及 1:100 蛋白酶和磷酸酶抑制剂混合物，分别为 SIGMA P8340 和 P2850）裂解细胞。裂解缓冲液包含 2 nM 铽标记的抗 pc-Jun（pSer73）或抗 pATF2（pThr71）检测抗体。让该检测在室温下平衡 1 小时后，在 BMG Pherastar 荧光板读数仪上测定 TR-FRET 发射率（激发波长为 340 nm，发射波长为 520 nm 和 490 nm；滞后时间 100 μs，积分时间 200 μs，发射率 =Em520/Em 490）[1]。MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

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参考文献：

[1]. Stebbins JL et al. Identification of a new JNK inhibitor targeting the JNK-JIP interaction site. Proc Natl Acad Sci U S A, 2008 Oct 28, 105(43):16809-13.