1. 检测原理
SYTO 9：绿色荧光核酸染料，可穿透完整细胞膜，标记所有细菌（活细菌和死细菌）。
PI（碘化丙啶）：红色荧光染料，仅能穿透受损细胞膜，标记死细菌。
结果判读：活细菌呈绿色荧光，死细菌呈红色荧光（双染时）。

2. 灵敏度
细胞水平：可检测低浓度细菌（如 10⁶个 /mL 菌液），适用于流式细胞术、荧光显微镜等不同检测平台。
操作优化：通过调整染料浓度（如流式细胞术推荐 SYTO 9 3μL/mL + PI 3μL/mL），可提升对微量样本的检测能力。

3. 特异性
膜通透性区分：SYTO 9 标记所有细菌，PI 仅标记膜受损的死细菌，有效区分死活状态。
菌种适用性：覆盖革兰氏阳性菌（如金黄色葡萄球菌）和阴性菌（如大肠杆菌）等多种常见细菌。

4. 线性范围
流式细胞术：在活 / 死细菌比例为 1:99 至 99:1 的范围内，检测结果与实际比例高度相关（需预实验优化染料浓度）。
荧光显微镜：通过调整菌液密度（如 OD670≈0.3），可实现半定量分析。

5. 准确性
染色条件优化：孵育时间 15 分钟（室温避光），减少非特异性吸附。
干扰控制：需洗涤去除培养基残留，避免核酸或其他成分影响染料结合。

6. 检测限
最低检测限：单染 SYTO 9 可检测到极少量活细菌（如 10⁶个 /mL），结合 PI 可进一步降低背景干扰。
定量检测限：通过流式细胞术可准确定量活细菌比例（如 10⁶个 /mL 菌液中活细菌占比≥1%）。

7. 精密度
批内重复性：同一样本多次染色，活 / 死细菌比例变异系数低（需标准化操作流程）。
批间一致性：不同批次试剂性能稳定（需参考产品说明书验证）。

8. 操作便捷性
一管式操作：提供预混染料或分步添加方案，适配荧光显微镜、酶标仪和流式细胞仪。
染色时间短：总耗时约 20 分钟（含孵育和洗涤）。

9. 样本类型
适用范围：悬浮菌液、生物膜、组织匀浆等，需注意样本前处理（如洗涤去除培养基）。
特殊要求：避免使用磷酸盐缓冲液，以防降低染色效率。

注意事项
染料毒性：SYTO 9 对部分细菌可能有轻微毒性（如高浓度长时间孵育），建议优化染色条件。
仪器兼容性：流式细胞术需使用 FITC（SYTO 9）和 PI 通道，荧光显微镜需匹配绿色 / 红色滤光片。

注：具体参数可能因试剂盒批次、细菌种类及实验条件略有差异，建议结合产品说明书和预实验优化。

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