U251-LUC-RFP-PURO细胞

                                                                                                                      细胞操作详细步骤

                                                                                                                           --悬浮细胞

1.细胞复苏

1.1准备一个T25的细胞培养瓶并做好标记，预热好的细胞完全培养基，一支15ml离心管，离心管中加入4-5ml细胞完全培养基。

1.2取出细胞冻存管，在37度水浴中快速解冻，将管子擦干消毒后迅速拿回生物安全柜。

1.3将细胞悬液转移到加有培养基的离心管中，1000转离心5分钟。

1.4倒掉上清，加入培养基轻轻重悬细胞亦可先将细胞团弹散后加入培养基混匀。

1.5将重悬好的细胞转移到T25细胞培养瓶，补充培养基到5ml左右，十字摇晃，将细胞铺匀后放入培养箱培养。

2.细胞传代

第一种方法：

2.1细胞密度达到2×10⁶细胞/ml时，1000转离心5分钟收集细胞，弃上清，加入新鲜培养基，使细胞密度在1-3×10⁵细胞/ml.

第二种方法：

2.2细胞密度达到2×10⁶细胞/ml时，将培养瓶中的细胞悬液分装到新的培养瓶，并补充新鲜培养基，使细胞密度在1-3×10⁵细胞/ml.

3.细胞冻存

将培养瓶中的细胞悬液转移到离心管中，1000转离心5分钟收集细胞，弃上清，加入冻存液，重悬细胞，并分装到冻存管，冻存密度1-2×10⁶细胞/ml。将冻存管放入程序降温盒，并放到-80℃冰箱，过夜后将冻存管转移到液氮保存。

4.注意事项

4.1建议收到细胞后先用我们配套的培养基和血清。收到活细胞的客户培养瓶中的培养基可回收使用，保存在4度可使用一周。

4.2不同实验室操作上会有些许差异，为了避免细胞不适应，请先按照说明书推荐的方法和操作步骤培养，待细胞冻存后可根据自己的习惯操作看细胞是否能够适应。

4.3建议收到细胞后，前几代及时冻存一些细胞，并最好是可以多冻存几个批次。

用途：该产品仅供科研实验使用，未经允许不得用于其它用途！