人角膜内皮细胞
基本信息
产品名称：
人角膜内皮细胞
英文名称：
人角膜内皮细胞
国产/进口：
国产
产地/品牌：
澳睿赛生物
型号：
详见说明
参考报价：
9350
销售商：
总点击数：
7
更新日期：
2025-05-21
产品类别：
性能参数
人角膜内皮细胞
| 一、细胞基本属性 | |
| 细胞名称 | 人角膜内皮细胞 |
| 组织来源 | 正常眼组织 |
| 商品货号 | ORCH366 |
| 种属来源 | 人 |
| 产品规格 | 5×105cells/T25细胞培养瓶 |
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细胞简介
|
角膜位于眼球前壁的一层透明膜，约占纤维膜的前1/6，从后面看角膜呈正圆形， 从前面看为横椭圆形。角膜厚度各部分不同， 中央部最薄。角膜分为五层， 由前 向后依次为：上皮细胞层、前弹力层、基质层、后弹力层、内皮细胞层。 角膜 内皮细胞的体外培养对研究角膜的生理学、病理学、免疫学以及分子生物学都是 极为重要的手段，常用于研究细胞代谢产物、病毒感染、各种生长因子和药物对 细胞生长的影响。 |
| 培养基 | 原代内皮细胞培养体系 |
| 换液频率 | 每2-3天换液一次 |
| 生长特性 | 贴壁培养 |
| 细胞形态 | 铺路石样， 不规则细胞 |
| 传代特性 | 细胞特性确定传代 |
| 消化液 | 0.25%胰蛋白酶 |
| 培养条件 | 气相： 空气，95%；CO2 ，5% |
质量检测： 澳睿赛实验室分离的人角膜内皮细胞经Vwf免疫荧光染色为阳性，纯度可达90%以上，且不 含有HIV-1、 HBV、 HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
人角膜内皮细胞体外培养周期有限；建议使用澳睿赛配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。 二、细胞培养状态
发货时发送细胞电子版照片
三、使用方法
在澳睿赛技术部标准操作流程下，建议您收到细胞后尽快进行相关实验。
客户收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。
2. 贴壁细胞消化
1)吸出T25细胞培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液1mL至T25培养瓶中，轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后，吸出多余胰蛋白酶消化液，37℃温浴1-3min；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后，再加入5ml完全培养基终止消化；
3)用吸管轻轻吹打混匀，按传代比例接种T25培养瓶传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
3. 悬浮细胞处理
1)收集T25细胞培养瓶中的培养基至50ml离心管中，用PBS清洗细胞培养瓶1-2次，收集清洗液；
2)1200-1500rpm离心3min，弃上清，收集细胞沉淀；
3)加入5ml新鲜完全培养基，用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞；将分散好的细胞调整合适密度接种至培养器皿中，置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
4)若遇到悬浮细胞团块较大，无法机械吹散时，向步骤2)中细胞沉淀添加0.25%胰蛋白酶消化液2mL至离心管中，用吸-管轻轻吹打混匀，37°C温浴2-3min，消化结束后，加入胰酶抑制剂(或血清)终止消化，用吸管轻轻吹打，分散细胞；1200rpm离心5min，弃上清，收集细胞沉淀；
5)加入5ml新鲜完全培养基，用吸管轻轻吹打混匀；按传代比例进行接种传代，然后补充新鲜的完全培养基至5mL，置于37°C、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；
6)待细胞状态稳定后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基。
4. 细胞收货脱落
1)收集所有细胞悬液，1000rpm，离心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%胰蛋白酶消化液0.5mL至离心管中，重悬沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱静置5-7min)；消化完向离心管内加入5ml完全培养基终止消化；
3)经1000rpm，离心5min，丢弃上清，用5ml完全培养基(补加1%FBS，促进贴壁)重悬沉淀，接种于新的培养瓶内；
4)待细胞完全贴壁后，培养观察；之后按照换液频率更换新鲜的完全培养基(37℃预热)。
5. 细胞实验
因原代细胞贴壁特殊性，贴壁的原代细胞在消化后转移至其他实验器皿（如玻璃爬片、培养板、共聚焦培养皿等）时，需要对实验器皿进行包被，以增强细胞贴壁性，避免细胞因没贴好影响实验；包被条件常选用鼠尾胶原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚赖氨酸PLL（0.1mg/ml），明胶（0.1%），依据细胞种类而定。悬浮/半悬浮细胞无需包被。
四、注意事项
1. 培养基于4℃条件下可保存3-6个月。
2. 在细胞培养过程中，请注意保持无菌操作。
3. 传代培养过程中，胰酶消化时间不宜过长，否则会影响细胞贴壁及其生长状态。
4. 建议客户收到细胞后前3天每个倍数各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和澳睿赛技术部沟通；由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联系，详尽告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪、回访直至问题得到解决。
5. 该细胞只可用于科研。
1)本产品未通过直接用于活体动物和人的审核
2)本产品未通过用于活体诊断的审核
备注：由于实验所用试剂、操作环境及操作手法的不同，以上方法仅供各实验室参考
公司简介
澳睿赛生物技术(上海)有限公司坐落于松江生命科学产业园，是一家专注于细胞生物学领域新产品、新技术开发的技术企业。公司产品涵盖：细胞系、原代细胞、标记细胞、耐药细胞、免疫细胞及胎牛血清、培养基、胰酶、双抗、无血清冷冻液、支原体/黑胶虫清除剂、细胞因子等产品，提供细胞形态和免疫相关检测、流式细胞检测 、细胞学服务、分子生物学检测等多种技术服务。追求细胞行业标准的引领者，澳睿赛始终致力于为您的细胞研究及细胞培养实验提供高品质、稳定性良好的产品。 澳睿赛拥有一支具有深厚造诣和丰富经验的高端技术人才，建设了高规格的研发实验室与生产车间，建立了规范的研发、生产、销售、客服管理体系。公司与国内外多家医院、高等院校、科研院所、生物医药公司建立了良好的合作关系，赢得了良好的市场声誉和广泛的客户认可，努力成为生命科学界可靠的合作伙伴和坚强的技术后盾。
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