简介:
尿素和氨是广泛存在的天然化合物。由于尿素是尿液中含量最丰富的有机溶质,而氨是微生物蛋白质分解代谢的结果,因此这些分析物可作为果汁、牛奶、奶酪、肉类和海鲜等食品的可靠质量指标。碳酸铵在烘焙食品中用作发酵剂,如快速面包、饼干和松饼。与其他一些试剂盒不同,该试剂盒受益于谷氨酸脱氢酶的使用,这种脱氢酶不受葡萄汁和葡萄酒中单宁的抑制。在葡萄酒工业中,氨的测定在酵母有效氮(YAN)的计算中非常重要。YAN由三种高度可变的成分组成,游离铵离子、伯氨基氮(来自游离氨基酸)和L-精氨酸侧链的贡献。为了最准确地测定YAN,应量化所有三种成分,这可以使用Megazyme的L-精氨酸/尿素/氨试剂盒(K-LARGE)和NOPA试剂盒(K-PANOPA)。尿素测定对于防止成品酒中已知致癌物氨基甲酸乙酯(EC)的形成非常重要。
原理:
尿素被脲酶(1)水解为氨(NH3)和二氧化碳(CO2)。
(脲酶)
(1) 尿素+H2O ——> 2NH3+CO2
在谷氨酸脱氢酶(GlDH)和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)的存在下,氨(铵离子;NH4+)与2-酮戊二酸反应形成L-谷氨酸和NADP+(2)。
(GlDH)
(2) 2-氧化葡萄糖酸盐+NADPH+NH4+ ——>L-谷氨酸+NADP++H2O
形成的NADP+的量与氨的量是化学计量的。每反应一摩尔尿素,就会消耗两摩尔NADPH。NADPH消耗量是通过340 nm处吸光度的降低来测量的。
套件:
Megazyme提供适用于进行50次检测(每次)的试剂盒。试剂盒包含完整的检测方法以及:
瓶1:缓冲液(18 mL,pH 8.0)加2-酮戊二酸和叠氮化钠(0.02%w/v)作为防腐剂。
在4°C下稳定2年以上。
瓶2:NADPH。冻干粉。在-10°C以下稳定5年以上。
瓶3:谷氨酸脱氢酶悬浮液(1.1 mL)。在4°C下稳定2年以上。
瓶4:尿素酶溶液(2.7 mL)。在-10°C以下稳定2年以上。
瓶5:尿素控制粉末(约2克)。稳定2年以上;在室温下密封储存。
试剂溶液的制备:
1.使用随附的瓶子1中的内容物。在4°C下稳定2年以上。
2.将瓶子2的内容物溶解在12毫升蒸馏水中。
在4°C下稳定约4周,或在-10°C以下稳定>2年(为避免重复的冻融循环,分为适当大小的等分试样并储存在聚丙烯管中)。
3.使用提供的瓶子3中的内容物。将瓶子存放在正确的位置。使用前,将瓶子旋转以混合内容物。在4°C下稳定2年以上。
4.使用随附的瓶子4中的内容物。将瓶子垂直存放。在-10°C以下稳定2年以上。
5.精确称取约70 mg尿素至1 L容量瓶中,用蒸馏水填充至标记处并充分混合。使用前准备新鲜。该对照溶液在-10°C以下稳定约3个月。
注:尿素标准溶液仅在对所用分光光度计的准确性有疑问或怀疑样品中的物质引起抑制的情况下进行测定。氨和尿素的浓度直接由NADPH的消光系数确定。
概要:
D-葡萄糖醛酸/D-半乳糖醛酸检测试剂盒是一种简单、可靠、准确的方法,用于测量和分析植物提取物、培养基/上清液和其他材料中的D-己糖醛酸(特别是D-葡萄糖醛酸和D-半乳糖醛酸)。
说明:如果所有体积减半,使用MegaQuantTM波分光光度计(D-MQWAVE)可使手动测试次数加倍。
规格:100次测定(手动)/1000次测定(微孔板)/1000个测定(自动分析仪)
运输温度:环境温度
储存温度:短期稳定性:2-8°C,
长期稳定性:见单个组件标签
稳定性:在推荐的储存条件下>1年
分析物:D-半乳糖醛酸、D-葡萄糖醛酸
分析格式:分光光度计、微孔板、自动分析仪
检测方法:吸光度
波长(nm):340
信号响应:增加
线性范围:每次测定5至150µg D-葡萄糖醛酸或D-半乳糖醛酸
检测限:~15.5 mg/L
反应时间(分钟):在25℃下约10分钟或在37℃下约5分钟
应用实例:植物材料和多糖等材料的水解物。
方法识别:新方法