艰难梭菌 tcdE 基因核酸检测试剂盒
艰难梭菌 tcdE 基因核酸检测试剂盒
【检验原理】：荧光定量PCR（qPCR）：采用TaqMan探针或SYBR Green法，引物设计覆盖tcdE保守区（如GenBank登录号NC_009089.1的特定区段）。
部分高端试剂盒整合多重检测（同步检测tcdA/tcdB/cdtA/B），全面评估毒力谱。
| 产品分类 | 荧光PCR | 产品货号 | YLS-P1668 |
| 检测范围 | 2×10 3 ～1×10 8 /mL | 最低检测限 | 1×10 3 /mL |
| 规格 | 50T | 应用范围 | 核酸的定性检测 |
产品概述
检测靶标
特异性靶向艰难梭菌tcdE基因（编码毒素E蛋白，参与毒素A/B的释放调控），区别于常规检测毒素基因（tcdA/tcdB）或保守基因（如16S rRNA）。
临床意义：tcdE基因缺失株毒力显著降低，检测该基因可辅助评估菌株致病潜力。
灵敏度：75%-98%（即真阳性率），可检出75-98%的实际阳性样本。
特异性：95%-99%（即真阴性率），可排除95%-99%的实际阴性样本。
技术原理影响
恒温荧光法（如LAMP技术）通过特异性引物和探针靶向IHNV基因序列，在恒温条件下扩增并实时监测荧光信号，其灵敏度与实时荧光定量PCR（qPCR）接近，但操作更简便。
荧光探针法的特异性受引物设计、探针结合效率及阈值设定影响，需通过严格验证确保低假阳性率
一、实验前准备
试剂与耗材
确认试剂盒包含：PCR反应液、引物/探针、阳性对照、阴性对照、DNA提取试剂等。
准备无核酸酶耗材（如枪头、离心管）及个人防护装备（手套、口罩）。
样本采集
使用无菌拭子采集咽拭子或伤口分泌物，立即保存于病毒保存液中。
二、样本处理与DNA提取
裂解与纯化
加入裂解液裂解样本，释放核酸。
通过氯仿抽提、沉淀分离DNA/RNA，75%乙醇洗涤后干燥。
逆转录（若检测RNA）
使用逆转录酶将RNA转化为cDNA（仅适用于RNA病毒检测）
【检验方法的局限性】
1. 当检测样本中被检核酸浓度低于本试剂盒的最di检出限shi可能会发生假阴性的结果。
2. 被检样本在采集、运输、储存以及处理过程中操作方式不当容易造成DNA降解而产生假阴性结果。
3. 样本在采集、运输、储存以及处理过程中发生交叉污染，则容易得到假阳性结果。
【产品性能指标】 产品的最di检出限为103Copies/mL，产品CV值≤3%。
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操作流程
样本处理：研磨植物组织或均质化食品样本DNA提取：推荐CTAB法或商业化提取试剂盒
PCR扩增：
反应体系：20 μL（含15 μL反应液+5 μL DNA模板）
扩增程序：95℃ 2min → (95℃ 15s → 60℃ 30s)×40循环
一、检测性能优势
高灵敏度
最低检出限达100-500拷贝/mL，显著高于传统培养法（需10-10 CFU/mL）。
强特异性
采用荧光探针法，避免与其他链球菌交叉反应，特异性≥99%。
二、临床应用价值
快速出结果
全程检测时间1-2小时（含核酸提取），较培养法（24-48小时）效率提升显著。
自动化兼容
支持批量样本处理，可搭配全自动核酸提取仪，适合大规模筛查。
三、操作便捷性
样本类型灵活
适用于阴道拭子、直肠拭子及尿液样本，采集后可直接检测。
操作简化
部分试剂盒采用一体化设计（如卡尤迪产品），减少人工操作步骤
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