本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，再通过离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA。离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，高效、专一吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。从1-5ml大肠杆菌LB培养液中，可快速提取近15-40μg纯净的高拷贝质粒DNA，提取率达85-90%。

注意事项：

1．溶液P1在使用前先加入RNaseA（将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2－8℃保存。
2．第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在漂洗液PW中加入无水乙醇。
3．使用前先检查溶液P2和P3是否出现浑浊，如有混浊现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。
4．注意不要直接接触溶液P2和P3，使用后应立即盖紧盖子。
5．所有离心步骤均为使用台式离心机室温下进行离心，速度为13,000 rpm (~17,900×g)。
6．提取的质粒量与细菌培养浓度、质粒拷贝数等因素有关。


低拷贝或大质粒（>10kb）提取:

如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应加大菌体使用量，使用5－10 ml过夜培养物，同时按比例增加P1、P2、P3的用量，洗脱缓冲液应在70℃预热，在吸附和洗脱时可以适当的延长时间，以增加提取效率。其它步骤相同。


质粒DNA浓度及纯度检测:

得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。电泳可能为单一条带，也可能为2到3条DNA条带，这主要与提取物培养时间长短、提取时操作剧烈程度等有关。OD260值为1相当于大约50 μg/ml 双链DNA。
OD260/OD280比值应为1.7-1.9，如果洗脱时不使用洗脱缓冲液，而使用去离子水，比值会偏低，因为pH值和离子存在会影响光吸收值，但并不表示纯度低。


储存条件：

本试剂盒在室温（15－25℃）干燥条件下，可保存1年。单独包装的RNase A 在-30～-15℃可稳定保存1年以上。若溶液产生沉淀，应在使用前置于37℃下溶解沉淀。加入RNase A后的溶液P1应置于2－8℃保存，可稳定保存半年。


使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等实验。