Corning胎牛血清使用方法

在细胞培养过程中，经常加入5%-20%的胎牛血清，最常使用的康宁胎牛血清浓度是10%。高浓度的血清可能改变细胞的基因表达谱，影响后续实验的结果，我们在实验中使用10%的Corning澳洲 胎牛血清培养293T细胞，效果非常好。但是有些细胞也会使用5%的康宁胎牛血清南美或者20%的康宁胎牛血清，要根据具体 细胞选择合适的康宁胎牛血清浓度。

1、需要长期保存的康宁胎牛血清必须储存于-20℃ - 70℃ 低温冰箱中。4℃冰箱中保存时间切勿超过1个月。切勿将血清在 37℃放置太久,否则血清会变得浑浊,同时血 清中的有效成分会 被破坏，而影响血清质量。如果一次无法用完一瓶,可 将40～45ml分装于无菌50ml离心管中。由于血清结冰时体积会增加约10%,因此,血清在冻入低温冰箱前，必须预留 一 定体积空间, 否则易发生污染或玻璃瓶冻裂。

2、一般厂商提供的血清为无菌,无需再过滤除菌。如发现血清有悬浮物,则可将血清加入培养液内一起过滤,切勿直接 过滤血清。

3、瓶装Corning胎牛血清解冻需采用逐步解冻法:-20℃ 至 -70℃ 低温冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室温,待全 部溶解后再分装,一般以50ml无菌离心管可分装40～45ml。在溶解过程 中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度 与成分均一,减少沈淀的发生。.切勿直接将血清从-20℃进入37℃解冻,这样因温度改变太大,容易造成蛋白质凝集而 出现沉淀。

4、热灭活是指56℃, 30分钟加热已完全解冻的血清.加热过程中须规则摇晃均匀.此热处理的目的是使血清中的补体 成分灭活.除非必须,一般不建议作此热处理,因为热处理会造成血清沉 淀物显著增多,而且还会影响血清的质量.补体 参与反应有:细胞毒作用, 平滑肌细胞收缩, 肥大细胞和血小板释放组胺, 增强吞噬作用, 促进淋巴细胞和巨噬细胞 发生化学趋化和活化。

5、血清中的沉淀物 絮状物:主要是血清中的脂蛋白变性及解冻后血清中纤维蛋白造成,这些絮状物不会影响血清本身 的质量.可用离心3000rpm,5分钟去除,也可不用处理。 显微镜下 "小黑点":经过热处理过的血清,沉淀物 的形成会显著增多。有些沉淀物在显微镜下观察象"小黑点",常误认为血清受污染。一般情况下,此小黑 点不会影响细胞生 长,但如果怀疑血清质量,则应立即停止使用,更换另一批号的血清。