病毒RNA提取试剂盒
Virus RNA Kit
(目录号：HS0408)
产品包装
试剂盒成分
50 preps
Buffer GB
15 ml
Buffer RD
30 ml
Buffer RW
60 ml
Buffer RE
10 ml
Proteinase K
1 ml
Spin Columns CG*
50个
Collection Tubes (2 ml)
50个
RNaseFree Tubes (1.5 ml)
50个
自备试剂
无水乙醇
储存条件
蛋白酶K于-20℃，其他组分室温（15 ~ 25℃）
产品简介
本试剂盒适用于从新鲜或冷冻的血浆、血清和无细胞体液中提取高质量的病毒RNA。无需使用苯酚、氯仿等有机溶剂抽提，独特的缓冲液/蛋白酶K体系能迅速裂解病毒，使病毒蛋白与RNA分离，在蛋白酶K的作用下降解病毒蛋白，在高盐状态下将病毒RNA选择性吸附于硅基质膜上，再通过快速的漂洗、离心步骤，去除蛋白等杂质，最后低盐的洗脱缓冲液将高纯度的病毒RNA从吸附柱膜上洗脱下来。
本试剂盒操作简单、快速，所得病毒RNA不含蛋白、核酸酶和其他杂质，可直接用于RT-PCR、Real-Time PCR、印迹等分子生物学实验。
产品特点
1.简便快速，1小时内可获得高纯度的病毒RNA。
2.无需有机溶剂抽提，使用安全。
3.重复性好，产量高。
4.所得病毒RNA纯度高，无污染物和抑制剂，方便下游应用。
注意事项：
1.血清或血浆避免反复冻融，否则会使蛋白变性或产生沉淀，导致提取的RNA片段小，提取量下降。
2.如缓冲液Buffer GB、Buffer RD结晶或产生沉淀，可在56℃水浴溶解。
3.所有离心步骤均为室温下操作。
4.本试剂盒也可提取高质量的病毒DNA，操作步骤相同。
操作步骤
1. 取1.5 ml离心管（自备），加入20 ul的Proteinase K溶液。
2. 向离心管中加入200 ul血清或血浆，然后再加入200 ul Buffer GB，涡旋震荡15 sec。
（注意：1、样本体积不足200 ul可以加入0.9%NaCl（自备）补足。2、为确保样本有效裂解，加入BufferGB后，需将样本与Buffer GB充分混匀。）
3．56℃孵育15 min，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。
4. 加入250 ul无水乙醇，涡旋震荡15 sec，室温放置5 min，使溶液温度降至室温，短暂离心，将管壁上的溶液收集到管底。
(注意：如果环境温度超过25℃，无水乙醇应在冰上预冷后使用。)
5．将一个SpinColumns CG*放入Collection Tubes(2 ml)中，将上一步所得溶液转移到离心吸附柱中，10 000 rpm离心30 sec，弃收集管中的废液。
6. 向吸附柱内加入500 ul的Buffer RD，室温10 000 rpm离心30 sec，弃收集管中废液。
（注意：Buffer RD中含有乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发）
7. 向吸附柱内加入500 ul的Buffer RW，室温10 000 rpm离心30 sec，弃收集管中废液。
（注意：如需进一步提高RNA纯度，可重复步骤7一次。BufferRW中含有乙醇，用后及时盖紧，以防乙醇挥发）
8．向吸附柱中加入500 ul无水乙醇，10 000 rpm离心30 sec，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。
9．室温12 000 rpm离心3 min，甩干残留液体。
（注意：此步不能省略，否则残留乙醇会影响质粒的后续使用）
10. 将离心吸附柱置于一个RNaseFreeTube (1.5 ml)中，小心打开吸附柱的盖子，室温放置3 min，使吸附膜完全变干。加入30 ~ 100 ul的洗脱液，室温放置2 ~ 5 min。12 000 rpm离心1 min，离心管底溶液即病毒RNA。
（注意：为增加洗脱效率，可将洗脱液在50 ~ 60℃预热。如需使用去离子水洗脱，可用NaOH调整其pH值在7.0 ~ 8.5之间，为了增加RNA回收率，可将得到的溶液重新加入到离心管中，室温放置2 min，再次离心收集）