SYBR^®Green qPCR Mix (Rox+)

产品组分

P2091a                                       

2×SYBR^®  Green qPCR Mix(Low Rox⁺) 1ml    1支 

超纯水                 1ml   1支    

P2092a                                        

2×SYBR^®  Green qPCR Mix(Low Rox⁺) 1ml  1支×5 

超纯水                 1ml   1支×5   

P2091b                                        

2×SYBR^®  Green qPCR Mix(High Rox⁺) 1ml    1支 

超纯水                 1ml     1支     

P2092b                                         

2×SYBR^®  Green qPCR Mix(High Rox⁺) 1ml  1支×5 

超纯水                 1ml   1支×5   

注意事项

• PCR反应体系条件视模板、引物等不同而各异，在实际操作中，各公司的PCR Mix的最适反应体系、条件及实验室设备、个人手感等因素不同，我们建议初次使用时，可按推荐PCR反应体系添加模板和引物，按TM±5℃做一个温度梯度实验，在确定最佳退火温度后，可以通过模板梯度和引物浓度梯度来优化体系；如已有成熟体系，也可在此基础上上下浮动，确定最佳反应体系和条件。
• 测序公司在进行PCR产物直接测序前，会对PCR产物进行纯化，去除体系中影响测序的组分，所以本产品中的溴酚蓝并不会影响测序反应。

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保存条件

-20℃保存

产品说明

本制品中的DNA聚合酶是一种改良后的Taq DNA聚合酶，结合东盛开发的最新Buffer系统，可以有效抑制非特异性PCR扩增，大大提高PCR扩增灵敏度，同时，在反应体系中添加了Rox内参染料，可校正不同孔间的荧光信号误差，适用于进行高灵敏度的Real Time PCR扩增反应。本制品适合于快速Real Time PCR扩增反应，可以在宽广的定量区域内得到良好的标准曲线，对靶基因进行准确定量、检测，重复性好，可信度高。

SYBR^®  Green Ⅰ是一种结合于DNA双螺旋小沟中的双链DNA结合染料。与双链DNA结合后，其荧光大大增强。这一性质使其用于PCR扩增产物的检测非常理想。SYBR^®  Green Ⅰ的最大吸收波长约为497nm,发射波长最大约为520nm。在PCR体系中，只有掺入DNA双链的SYBR^®  Green Ⅰ才能发射强荧光信号，而不掺入链中的SYBR^®  Green Ⅰ染料分子仅有微弱荧光信号背景，从而保证荧光信号的增强与PCR产物的增加同步。

Rox⁺染料是一种不参与PCR反应的荧光染料，最大吸收波长约为576nm,最大发射波长约为601nm,其主要作用是校正上样量误差和每个孔的荧光信号经过滤光片，再经过聚焦到CCD的光程差异。

产品特点

• 特异性高：热启动功能与优化缓冲液可防止非特异性扩增和形成引物二聚体
• 敏感性：可检测低拷贝模板
• 线性范围广：可精确定量9个数量级
• 通用性好：几乎兼容所有实时荧光定量PCR仪
• 可重复性、使用方便：即用型2×Mix,减少加样错误和反应体系配置时间

产品用途

• 实时PCR(使用SYBR^®  Green Ⅰ)
• 实时RT-PCR(使用SYBR^®  Green Ⅰ)

质量控制

相关测试表明无外源内切酶或外切脱氧核糖核酸酶、核糖核酸酶污染；功能测试：qPCR分析扩增的特异性、敏感性与可重复性。

反应体系

50μl标准体系

以λDNA为模板，扩增1kb目的片段。

乙肝病毒标准血清                      1μl

引物1（10μM）                        2μl

引物2（10μM）                        2μl

2×SYBR^®  Green qPCR Mix( Rox⁺)          25μl

超纯水                          补足至50μl

反应条件

在实际操作中需根据模板、目的片段的大小、剪辑序列和引物的长短等具体情况，设定最佳的反应条件（温度、时间等）。

94℃      20sec

94℃      10sec

55℃      20sec      40 Cycles

72℃      30sec

实例图

右上图为扩增曲线和溶解曲线，是使用SYBR^®  Green qPCR Mix(High Rox⁺) 在STRATAGENE MX3005P上进行的Real Time PCR扩增结果。

扩增曲线

溶解曲线  

Q&A

问：为什么要在Real-time PCR应用Rox+

答：Rox+染料是一种不参与PCR反应的荧光染料，其作用如下：

• 校正单次反应运行中由于泡沫或蒸发/冷凝而导致的信号改变；
• 为故障分析提供一项强有力的诊断工具：每次循环采集参比染料信号，不受PCR反应影响；
• 均一化校正由于移液误差或蒸发所导致的批内体积差异；
• 均一化校正批间体积差异，提供更连续一致的批间重复Ct值。

因而加入Rox+染料可保证最大程度提升实验数据可靠性和重复性。