神经氨酸酶抑制剂筛选试剂盒
产品简介：
Ø 神经氨酸酶抑制剂筛选试剂盒(Neuraminidase Inhibitors Screen Kit)是一个用荧光法快速高灵敏度高通量筛选神经氨酸酶
抑制剂的试剂盒。也是我们所知的全世界第一个神经氨酸酶抑制剂筛选试剂盒。
Ø 禽流感病毒在其外壳上有两种糖蛋白，一种是haemagglutinin，简称HA，另一种是neuraminidase，简称NA，也称唾液酸酶
(sialidase)。目前治疗H5N1型禽流感的药物包括瑞士罗氏制药公司生产的Oseltamivir(Tamifu，达菲为其商品名)和葛兰素史
克公司(GlaxoSmithKline)生产的Zanamivir(Relenza，瑞乐砂为其商品名)，这两种药物都是neuraminidase的抑制剂。但达
菲价格昂贵，普通百姓很难承受。并且达菲生产能力有限，如果发生较大规模的禽流感疫情，该药物的供给量有限。另外，最近
在越南发生的禽流感疫情中已经发现了达菲耐受的禽流感病毒，在达菲的临床测试中就发现存在一些对达菲耐受的禽流感病毒。
Zanamivir不能口服，使应用范围受到限制。 因此，寻找新的神经氨酸酶抑制剂作为治疗禽流感的药物非常迫切。希望本试剂盒
能协助一些禽流感研究专家寻找到更好的价廉物美的禽流感药物。
Ø 试剂盒中提供了纯化的神经氨酸酶和可以被神经氨酸酶催化产生荧光的底物，并且对神经氨酸酶的用量和底物的使用量进行了优
化。不仅能检测出IC50很低的抑制剂，也能检测出IC50较高的抑制剂。
Ø 本试剂盒可以筛选溶解于水的抑制剂，也可以筛选溶解于甲醇、乙醇、DMSO的抑制剂。其它溶剂未经测试。
Ø 本试剂盒所用的neuraminidase不是禽流感病毒来源的，但和禽流感病毒H5N1来源的neuraminidase高度保守。适合于初步大规
模筛选神经氨酸酶抑制剂。更加精确的测定需使用碧云天的H5N1神经氨酸酶抑制剂鉴定试剂盒。
Ø 一个包装的本试剂盒可以检测100个样品或标准品。
包装清单：
产品编号 产品名称 包装
P0309-1 神经氨酸酶检测缓冲液 10ml
P0309-2 神经氨酸酶 1ml
P0309-3 神经氨酸酶荧光底物 1ml
P0309-4 Milli-Q水 1.2ml
— 说明书 1 份
保存条件：
-20℃保存，半年有效。
注意事项：
Ø 神经氨酸酶和神经氨酸酶荧光底物尽量避免反复冻融。
Ø 试剂盒中所用溶液溶解后4℃保存，两天有效。如果两天内不能全部用完，建议尽早把留作以后使用的神经氨酸酶和神经氨酸酶
荧光底物适当分装后-70℃保存，-20℃冻存也可，但有效期会较短。其余试剂直接-20℃或-70℃保存即可。
Ø 需使用荧光酶标仪，并需自备专门用于荧光酶标仪荧光检测的96孔荧光酶标板。或使用可以检测小体积样品的荧光分光光度计。
使用荧光分光光度计时参考荧光酶标板的操作方法。
Ø 由于荧光检测非常灵敏，测定出来的荧光强度有时容易产生波动。一方面要避免灰尘等掉入检测孔中产生荧光干扰，另一方面所
有检测最好在同一块检测板上做双份平行检测甚至三份平行检测。
Ø 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 标准曲线检测的准备(参考表1)：
a.
在96孔荧光酶标板内每孔加入70微升神经氨酸酶检测缓冲液。
b. 每孔再分别加入0、1、2、5、7.5、10微升神经氨酸酶。
c. 每孔再加入0-20微升Milli-Q水使每孔总体积为90微升。
2. 样品检测的准备(参考表1)：
a. 在96孔荧光酶标板内每孔加入70微升神经氨酸酶检测缓冲液。
b. 每孔再加入10微升神经氨酸酶。
c. 每孔再加入0-10微升待筛选的神经氨酸酶抑制剂样品。
d. 每孔再加入0-10微升Milli-Q水使每孔总体积为90微升。
3. 检测(参考表1)：
a. 振动混匀约1分钟。
b. 37℃孵育2分钟使抑制剂和神经氨酸酶充分相互作用，做标准曲线的样品也一起孵育。
c. 每孔加入10微升神经氨酸酶荧光底物。
d. 再振动混匀约1分钟。
e. 37℃孵育20分钟后进行荧光测定。激发波长为360nm，发射波长为440nm。
如果所用的荧光酶标仪的灵敏度较高，37℃孵育10分钟后即可进行荧光测定。如果所用的荧光酶标仪的灵敏度较低，可以在孵育
30分钟或60分钟后进行荧光测定。由于反应是连续进行的，可以在不同时间点进行测定，以确定适合您的检测体系的最佳孵育时
间。
表1
标准曲线 样品
神经氨酸酶检测缓冲液 70微升 70微升
神经氨酸酶 0-10微升 10微升
待测样品 － 0-10微升
Milli-Q水 0-20微升 0-10微升
神经氨酸酶荧光底物 10微升 10微升
总体积 100微升 100微升
4. 计算：
根据标准曲线可以计算出样品对于神经氨酸酶的抑制百分比。对检测出来的有效的抑制剂，做适当的浓度曲线就可以测定出该抑
制剂的IC50。
碧云天由在哈佛大学工作和学习的留学人员创办于2001年。20余年来专注于自主研发和生产。2007年成立上海碧云天生物技术有限公司，为国家级专精特新“小巨人”企业，并进一步入选第二批第一年建议支持的国家级专精特新“小巨人”企业，也是上海市科技小巨人企业、G60科创走廊一类重点扶持企业、上海市高新技术企业和上海市专精特新中小企业。江苏碧云天为江苏省高新技术企业，南通市双创优企。公司主要研发生产生物、医学研究用试剂、试剂盒、消耗品和仪器设备，同时提供生命科学研究的技术服务和一站式实验仪器设备采购平台。公司核心团队由来自美国哈佛大学、NIH、香港大学、中国科学院等国内外著名大学和科研机构的高水平科研人员及诺华、默克等顶尖医药企业的管理人员组成。2016年1人获国务院政府特殊津贴，2人入选“松江区优秀人才”；2019年1人入选国家百千万人才工程，1人入选上海市领军人才，6人获G60科创走廊优秀人才奖励，3人入选长三角G60科创走廊科技精英，3人入选上海市松江区拔尖人才培养计划。2019年碧云天荣获江苏省双创人才创业类第一名，2020年碧云天团队荣获江苏省双创团队创业类最高资助。2020年1人荣获上海市五四青年奖章，多人获G60科创走廊优秀人才奖励。2021年2人次入选国家级领军人才，2022年1人次入选国家级创新人才。截止2022年12月，已有累计超过150000篇注明使用碧云天产品的研究论文发表在包括Cell、Nature、Science等国际高水平学术期刊。Beyotime品牌年度文献引用率国内领先，并跻身全球20强。碧云天将继续致力于科研用技术和产品的研发，用我们最顶尖的技术、最成熟的产品、最热情的服务，服务生命科学，造福人民健康！
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