产品简介：

Ø 碧云天生产的细胞凋亡－DNA Ladder抽提试剂盒(Apoptosis, DNA Ladder Extraction Kit)，是针对细胞凋亡过程中产生的

核小体间的DNA链断裂而设计的。可以非常有效地抽提最小片断为180-200bp的DNA ladder，同时又可以抽提到50kb以上的基因
组DNA。
Ø DNA ladder也称DNA fragmentation，是细胞凋亡的一个重要指标。通常观察到DNA ladder，就可以判定细胞发生了凋亡。
Ø 本试剂盒足够抽提50个细胞或组织样品。



包装清单：

样品裂解液 30毫升
蛋白酶K 130微升
10M 醋酸铵 6毫升
TE 6毫升
说明书 1份




保存条件：

-20℃保存，一年有效。



注意事项：

Ø 需自备Tris平衡苯酚、氯仿和无水乙醇。Tris平衡苯酚可以向碧云天订购。


Ø 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

使用说明：

1.
样品收集


a) 对于组织样品：
切下组织，并剪切成小块，置液氮中冻结，研碎或捣碎。
b) 对于贴壁细胞：
胰酶消化后，PBS或生理盐水洗一次，1000-2000g离心1-2分钟，弃上清，收集细胞。
c) 对于悬浮细胞：
1000-2000g离心1-2分钟，弃上清，收集细胞。
2. DNA ladder抽提

a) 样品处理完毕后，每1毫升样品裂解液中加入5微升蛋白酶K，混匀。
b) 对于上述处理好的样品，每5毫克组织或者106个细胞中加入500微升添加了蛋白酶K的样品裂解液，Vortex混匀，充分裂
解组织或细胞。
c) 50℃水浴消化过夜。

d) 加入500微升Tris平衡苯酚抽提样品。
加入Tris平衡苯酚后可以Vortex，或剧烈颠倒或晃动10-30秒，以使酚相和水相充分相互作用。然后4℃，约12000g离心5
分钟。
e) 吸出酚相及中间相(可以吸除少量靠近中间相的水相液体)，剩余的水相用等体积Tris平衡酚再抽提一次。
f) 吸出酚相及中间相 (可以吸除少量靠近中间相的水相液体)，剩余的水相用等体积氯仿再抽提一次。
g) 吸出约300微升上清液，加入60微升10M醋酸铵和600微升无水乙醇，颠倒数次混匀，此时可见DNA沉淀产生。-20℃冻存1

小时，以充分沉淀小片断DNA。
h) 12,000g离心10分钟，弃上清。加入70%乙醇洗涤DNA沉淀一次。
i) 尽量吸除残余的乙醇，待看不到明显的液体时，立即加入50-100微升TE溶解DNA。 注意：不可过分干燥基因组DNA沉

淀，否则会极难溶解。如果发现DNA沉淀难以溶解，可以在4℃用摇床缓慢摇动过夜，以溶解DNA沉淀。
j) 取部分抽提得到的基因组DNA，琼脂糖凝胶电泳分析。如果细胞发生凋亡，就可以观察到典型的DNA ladder。