简介:
谷物豆类是人类和牲畜饮食的重要组成部分。半乳糖基蔗糖低聚糖(棉子糖、水苏糖和马鞭草糖)是许多食用豆类的主要成分,谷物豆类的抗营养活性通常与这些低聚糖的存在有关。由于缺乏α-半乳糖苷酶,半乳糖基葡萄糖低聚糖在上肠中不会水解。在小肠下部,它们被细菌代谢,产生甲烷、氢气和二氧化碳,导致肠胃气胀和腹泻。因此,半乳糖基蔗糖低聚糖是限制单胃饮食中谷物豆类使用的一个因素。
几种溶剂已被用于从豆类种子粉中提取半乳糖基蔗糖低聚糖。这些通常是水/醇混合物。在提取之前(或同时),内源性α-半乳糖苷酶和转化酶被灭活至关重要。这可以通过在面粉进行水提取之前将面粉在乙醇或乙醇水溶液混合物中回流来实现。
提取的半乳糖基蔗糖低聚糖的鉴定和定量已经使用一系列色谱程序实现,但其中许多方法充其量是半定量的。采用高效液相色谱和低压液相色谱(使用Bio-Gel P2)的色谱程序是定量的,但可能很耗时,特别是在样品制备领域。
众所周知,棉子糖、水苏糖和马鞭草糖被α-半乳糖苷酶水解为D-半乳糖和蔗糖。用于测量棉子糖的生化试剂盒是市售的。这些试剂盒中使用的α-半乳糖苷酶(来自生咖啡豆)可快速水解棉子糖,但对水苏糖和马鞭草糖的作用相当缓慢,因此在推荐的培养条件下不能完全水解这些低聚糖。相比之下,目前程序中使用的酶(来自黑曲霉)很容易快速地催化棉子糖、水苏糖和马鞭草糖完全水解为D-半乳糖和蔗糖。
原理:
半乳糖基蔗糖低聚糖使用α-半乳糖苷酶和转化酶水解为D-半乳糖、D-葡萄糖和D-果糖。然后使用葡萄糖氧化酶/过氧化物酶试剂测定D-葡萄糖。该方法不区分棉子糖、水苏糖和马鞭草糖,而是将它们作为一个整体进行测量。由于每种棉子糖系列低聚糖中有一摩尔含有一摩尔D-葡萄糖,因此浓度以摩尔为基础表示。同时测定样品提取物中的游离蔗糖和D-葡萄糖。
套件:
适用于进行120次D-葡萄糖、蔗糖和棉子糖系列低聚糖测定的试剂盒可从Neogen获得。试剂盒包含完整的检测方法以及:
瓶1:硫酸铵中的α-半乳糖苷酶悬浮液(黑曲霉;2 mL)。在4°C下储存。有效期见单独标签。
瓶2:含有叠氮化钠(0.02%)作为防腐剂的转化酶溶液(酵母;6mL)。
在4°C下储存。有效期见单独标签。
瓶3:GOPOD试剂缓冲液。缓冲液(50 mL,pH 7.4)、对羟基苯甲酸和叠氮化钠(0.09%w/v)。在4°C下储存。有效期见单独标签。
瓶4:GOPOD试剂酶。葡萄糖氧化酶加过氧化物酶和4-氨基安替比林。冻干粉。
储存温度低于-10°C。有效期见单独标签。
瓶5:在0.2%(w/v)苯甲酸中的D-葡萄糖标准溶液(5 mL,1.0 mg/mL)。
在室温下密封储存。有效期见单独标签。
瓶6:大豆粉参考样品(含葡萄糖、蔗糖和半乳糖基蔗糖低聚糖)。
在室温下密封储存。有效期见单独标签。
概要:
规格:每个试剂盒120次测定
运输温度:环境温度
储存温度:短期稳定性:2-8oC,
长期稳定性:见单个组件标签
稳定性:在推荐的储存条件下>2年
分析物:D-葡萄糖、棉子糖、蔗糖
检测形式:分光光度计
检测方法:吸光度
波长(nm):510
信号响应:增加
检测限:100mg/L
反应时间(分钟):~20分钟
应用实例:分析谷物豆类和其他含有棉子糖、水苏糖和马鞭草糖的材料。
方法识别:在食品分析中使用和接受
棉子糖/蔗糖/D-葡萄糖检测试剂盒用于测量和分析种子和种子粉中的D-葡萄糖、蔗糖和棉子糖、水苏糖和马鞭草糖。基于棉子糖、水苏糖和马鞭糖酶解为D-葡萄糖、D-果糖和D-半乳糖的D-葡萄糖测定。