摘要：G-418(遗传霉素）在分子生物学上的用途主要是基因克隆后表达载体的筛选。G-418(遗传霉素）可溶于水、甲醇、缓冲液和培养基。溶解后，用0.22um滤膜过滤除菌，分成小包装，4℃可保存12个月，-20℃保存时间更长。最常用的G-418(遗传霉素）储存液使用100mMHEPES(pH7.3)配制，G-418溶液浓度为50mg/ml。使用HEPES配制G-418溶液的好处是：加入储存液不会改变培养体系的pH值。

一，G-418产品基本信息。

G-418工作液配置方法：溶解后，用0.22um滤膜过滤除菌，分成小包装，4℃可保存12月，-20℃保存时间更长。最常用的G-418(遗传霉素）储存液使用100mMHEPES(pH7.3)配制，G-418溶液浓度为50mg/ml。使用HEPES配制G-418溶液的好处是：加入储存液不会改变培养体系的pH值。

二，G-418(遗传霉素）能用用于抗性筛选实验的原理：

     G418（Geneticin,遗传霉素）是一种氨基糖苷类抗生素 ,在分子遗传实验中，遗传霉素（G418）是稳定转染实验中最常用的抗性筛选试剂。遗传霉素能够抑制转座子Tn601，Tn5 的基因表达,从而干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成，遗传霉素对原核和真核等细胞产生毒素 ,包括细菌、酵母、植物和哺乳动物细胞 ,也包括原生动物和蠕虫。在基因筛选实验中，当neo基因被整合进真核细胞DNA后 ,能启动neo基因编码的序列转录为mRNA ,使得抗性产物氨基糖苷磷酸转移酶能够的高效表达 ,使细胞获得G418抗性，能够表达此类抗性基因的细胞在含有G418的选择性培养基中能够生长。目前G418的这一选择特性 ,已在基因转移、基因敲除、抗性筛选以及转基因动物等方面得以广泛应用。

三，G-418(遗传霉素）在抗性筛选实验中的具体应用。

1，G-418(遗传霉素）在抗性筛选实验中的浓度：

    真核表达筛选用抗生素，可以用于筛选表达特定抗性基因的稳定细胞株。筛选哺乳动物细胞，推荐起始筛选浓度为400微克/毫升；筛选植物细胞，推荐起始筛选浓度为10微克/毫升；筛选酵母，推荐起始浓度为500微克/毫升。根据起始浓度的效果可以再适当升高或降低G-418的使用浓度。将细胞稀释至1000cell/ml，取100ul细胞液加入有培养基的24孔板，将每孔中的G418浓度稀释至0,100,200,300,400,500,600,700,800,900,1000,1100ug/ml等12个级别, 培养10-14天，以细胞全部死亡最低浓度为基准，一般浓度为400-800ug/ml左右，筛选时比该浓度再高一个级别，维持时使用筛选浓度的一半即可。

2，常见哺乳动G-418的抗性浓度浓度范围：（如表）

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