引言
L - 天冬酰胺和氨的简单快速检测，近年来在以下两大应用领域变得至关重要：
1. 细胞培养
L - 天冬酰胺是某些细胞培养基的必需成分。然而，将这种氨基酸加入生长培养基会带来两个主要问题：首先，L - 天冬酰胺不稳定，会自发分解为 L - 天冬氨酸和游离铵离子；其次，释放的铵离子对细胞毒性很大。为解决这些问题，通常在使用前添加 L - 天冬酰胺，其浓度及铵离子浓度需在培养过程中频繁监测。
本试剂盒（K-ASNAM）基于先进的重组酶技术，检测速度极快（约 20 分钟），并能以非常简单的形式同时测量 L - 天冬酰胺和氨的值。作为检测方法的一部分，检测过程中还会生成 L - 谷氨酰胺，这一结果在细胞培养应用中可能具有重要意义。
2. 丙烯酰胺前体
目前已知，当食品在约 160°C 以上加热时，会生成大量致癌化合物丙烯酰胺，这对人类健康构成明显威胁。受影响的食品包括薯片、炸薯条、烤土豆及其他油炸、烘烤或烤制食品（如烘焙食品、早餐麦片和咖啡）。
L - 天冬酰胺、铵离子、D - 果糖和 / 或 D - 葡萄糖是形成丙烯酰胺的关键前体。本试剂盒（K-ASNAM）非常适合简单且经济高效地测定这些前体的浓度，并且与 Megazyme 的 D - 果糖 / D - 葡萄糖试剂盒（K-FRUGL）配合使用，可测定所有四种理想前体的浓度。
值得注意的是，该方法首先对 L - 谷氨酰胺（一种氨基酸）和氨进行转化 / 定量，否则由于其在多种其他样品中含量低但不可忽视，会导致干扰。此外，该试剂盒还适用于高效分析 L - 天冬酰胺、L - 谷氨酰胺和氨。
天冬酰胺酶是一种将 L - 天冬酰胺转化为 L - 天冬氨酸的酶，因此在减少丙烯酰胺水平方面具有潜在应用价值。然而，若采用天冬酰胺酶处理，需确认游离 L - 天冬酰胺已成功转化为 L - 天冬氨酸。
其他相关试剂盒
Megazyme 还提供其他快速组织培养检测试剂盒，包括氨检测试剂盒（K-AMIAR）、L - 谷氨酰胺 / 氨检测试剂盒（K-GLNAM）、D - 葡萄糖检测试剂盒（K-GLUHK 或 K-GLUC）和 L - 乳酸检测试剂盒（K-LATE）。

原理
L - 天冬酰胺、L - 谷氨酰胺和氨的测定通过三个简单快速的步骤完成：
L - 谷氨酰胺的转化：在过量谷氨酰胺酶的作用下，L - 谷氨酰胺首先被转化为 L - 谷氨酸和铵离子（NH₄⁺）（反应式 1）：
                           ​（谷氨酰胺酶催化）
L - 谷氨酰胺 + H₂O       →         L - 谷氨酸 + NH₄⁺
氨的定量反应：样品中的氨以及反应式（1）生成的氨，在还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）和谷氨酸脱氢酶（GlDH）存在的条件下，与 2 - 氧戊二酸反应生成 L - 谷氨酸和 NADP⁺（反应式 2）：
                                                  （GlDH 催化）
NH₄⁺ + 2 - 氧戊二酸 + NADPH         →           L - 谷氨酸 + NADP⁺ + H₂O
生成的 NADP⁺与氨的量呈化学计量关系，而 NADPH 的消耗量可通过测定 340 nm 处的吸光度降低来量化。
L - 天冬酰胺的水解：在天冬酰胺酶的作用下，L - 天冬酰胺迅速水解为 L - 天冬氨酸和铵离子（反应式 3）：
                              ​（天冬酰胺酶催化）
L - 天冬酰胺 + H₂O             →           L - 天冬氨酸 + NH₄⁺
释放的铵离子通过反应式（2）进一步引发吸光度下降，该吸光度变化与 L - 天冬酰胺的含量呈化学计量关系。
试剂盒组成及储存条件
（每个试剂盒可分别进行 50 次 L - 天冬酰胺、L - 谷氨酰胺和氨的检测，具体组分如下）：
瓶 1：缓冲液（11 mL，pH 4.9）含叠氮化钠（0.02% w/v，作为防腐剂）。
储存条件：4°C 下稳定＞2 年。
瓶 2：（x2）缓冲液（25.5 mL，pH 8.0）含 2 - 氧戊二酸和叠氮化钠（0.02% w/v，作为防腐剂）。储存条件：4°C 下稳定＞2 年。
瓶 3：（x2）NADPH 冻干粉。储存条件：4°C 下稳定＞2 年。
瓶 4：谷氨酰胺酶悬液（1.1 mL）。储存条件：-10°C 以下稳定＞5 年。
瓶 5：谷氨酸脱氢酶悬液（2.2 mL）。储存条件：4°C 下稳定＞2 年。
瓶 6：天冬酰胺酶悬液（1.1 mL）。储存条件：4°C 下稳定＞2 年。
瓶 7：氨标准溶液（5 mL，0.04 mg/mL），含 0.02% 叠氮化钠。储存条件：4°C 下稳定＞2 年。
瓶 8：L - 天冬酰胺对照粉末（~2 g）。储存条件：4°C 下稳定＞2 年。
说明：Megazyme 提供的试剂盒包含完整的检测方法，适用于科研及质量控制场景。
 

• 瓶 1 和瓶 2：直接使用瓶中试剂，储存条件为 4°C 稳定＞2 年。
• 瓶 3：将其中一瓶的内容物溶于 12 mL 蒸馏水中，4°C 稳定＞1 年，或 - 10°C 以下稳定＞2 年（为避免反复冻融，建议分装至聚丙烯管中保存）。
• 瓶 4、瓶 5 和瓶 6：直接使用瓶中试剂。首次开启前，需摇晃瓶子以除去橡胶塞表面可能沉积的酶，随后保持瓶子直立储存，4°C 稳定＞2 年。
• 瓶 7：直接使用瓶中试剂，4°C 稳定＞2 年。
• 步骤 8：准确称取约 0.300 g L - 天冬酰胺至 1 L 容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，充分混匀。-10°C 以下稳定约 3 个月。

• 0.50 mg/L（L - 天冬酰胺）
• 0.54 mg/L（L - 谷氨酰胺）
• 0.06 mg/L（氨）
  线性范围：
• 每次检测 0.2 至 7.0 µg 氨，或 0.5 至 50 µg L - 天冬酰胺或 L - 谷氨酰胺
  信号响应：降低
  波长（纳米）：340
  检测方法：吸光度法
  检测形式：分光光度计、微孔板
  分析物：氨、L - 天冬酰胺、L - 谷氨酰胺
  稳定性：在推荐储存条件下＞6 个月
  长期稳定性：参见各组分标签
  储存温度：
• 短期稳定性：2-8°C
  运输温度：常温
  规格：每个试剂盒含 100 次检测（每项检测 50 次）