引言
根据定义，抗性淀粉（RS）是指淀粉中未被人体小肠内酶类分解的部分。它进入大肠后被部分或完全发酵。通常认为，抗性淀粉是构成总膳食纤维（TDF）的成分之一。
在开发总膳食纤维整合测定法（INTDF 方法，AOAC 方法 2009.01；2011.25）时，研究人员模拟了抗性淀粉测定法中的孵育条件，包括使用胰淀粉酶 / 淀粉葡萄糖苷酶（PAA/AMG）的孵育时间（即 16 小时）。然而，在针对磷酸盐交联淀粉（RS4）等 “新型” 抗性淀粉材料水解特性的最新研究中，有一点逐渐明确：为了获得具有生理学意义的抗性淀粉（RS）数值，PAA/AMG 的孵育时间应与食物在小肠中的停留时间一致，即 4 小时（而非 AOAC 方法 2009.01 中使用的 16 小时）。为了通过 4 小时孵育获得与回肠造口术数据一致的 RS 数值，必须提高 PAA 和 AMG 的浓度。这种被称为快速总膳食纤维整合测定法（RINTDF）的新方法已通过 AOAC 国际组织和国际谷物科学与技术协会（ICC）的实验室间评估，成为 AOAC 方法 2017.16和 ICC 方法 185。
基于这些进展，显然原始抗性淀粉测定法也需要更新，以纳入 PAA/AMG 的 4 小时孵育步骤。目前这一更新已完成，其中描述的该方法称为快速抗性淀粉测定法（RAPRS）。
方法原理
将样品置于线性振荡水浴中，在 37°C 条件下用饱和水平的纯化胰淀粉酶（PAA）和淀粉葡萄糖苷酶（AMG）孵育 4 小时。在此期间，非抗性淀粉（可消化淀粉）在两种酶的共同作用下溶解并水解为 D - 葡萄糖。
（PAA + AMG，pH 6.0，37°C，4 小时）
(1) 淀粉 + H₂O       →        D - 葡萄糖 + 抗性淀粉（RS）
通过加入等体积的乙醇或工业甲基化酒精（IMS，变性乙醇）终止反应，抗性淀粉经离心后以沉淀形式回收。
                     （乙醇或 IMS）
(2) 反应混合物          →         可溶性 D - 葡萄糖 + 抗性淀粉沉淀
将此抗性淀粉沉淀用工业甲基化酒精（IMS）水溶液或乙醇（50% 体积比）悬浮洗涤两次，随后离心。通过倾析法去除游离液体。沉淀中的抗性淀粉在冰水浴中用磁力搅拌器剧烈搅拌，溶解于 1.7 M 氢氧化钠溶液中。该溶液用乙酸盐缓冲液中和后，淀粉在淀粉葡萄糖苷酶（AMG）的作用下定量水解为 D - 葡萄糖。
                              （AMG，pH 4.5，50°C，30 分钟）
(3) 溶解的抗性淀粉沉淀                  →          D - 葡萄糖
D - 葡萄糖含量通过葡萄糖氧化酶 / 过氧化物酶试剂（GOPOD）测定，此值即代表样品中的抗性淀粉含量。
                                        （葡萄糖氧化酶）
(4) D - 葡萄糖 + O₂ + H₂O         →        D - 葡萄糖酸 + H₂O₂
                                                                     （过氧化物酶）
(5) 2H₂O₂ + 对羟基苯甲酸 + 4 - 氨基安替比林         →      醌亚胺染料 + 4H₂O
非抗性淀粉（可溶性淀粉）的测定方法为：合并原始上清液和洗涤液，定容至 100 mL，并用 GOPOD 试剂测定 D - 葡萄糖含量。
试剂盒
提供100 次抗性淀粉（RS）检测的试剂盒。试剂盒包含完整的检测方法及以下组分：
瓶 1：纯化胰淀粉酶（PAA，40KU/g）与淀粉葡萄糖苷酶（AMG，17KU/g）混合物；3.0 克。保质期＞5 年；需密封干燥保存于 - 10°C 以下。
瓶 2：淀粉葡萄糖苷酶溶液 [14 mL，对可溶性淀粉的酶活性为 3,300 U/mL（或对 β- 对硝基苯麦芽糖苷的酶活性为 200 U/mL）]，pH 4.5，40°C 条件下测定。AMG 溶液应基本不含可检测水平的游离 D - 葡萄糖。保质期＞3 年，4°C 保存。
瓶 3：GOPOD 试剂缓冲液。缓冲液（50 mL，pH 7.4），含对羟基苯甲酸和叠氮化钠（0.09% w/v）。保质期＞4 年，4°C 保存。
瓶 4：GOPOD 试剂酶。含葡萄糖氧化酶、过氧化物酶和 4 - 氨基安替比林的冻干粉末。
保质期＞5 年，-10°C 以下保存。
瓶 5：D - 葡萄糖标准溶液（5 mL，1.0 mg/mL），溶于 0.2%（w/v）苯甲酸溶液。
保质期＞5 年；密封室温保存。
瓶 6：抗性淀粉对照品（约 5 g）。标签标注抗性淀粉含量。保质期＞5 年；密封室温保存。
概要：
规格：每试剂盒可进行 100 次检测
运输温度：常温
储存温度：短期稳定性：2-8°C，
分析物：抗性淀粉
检测形式：分光光度计
检测方法：吸光度法
波长（纳米）：510
信号响应：吸光度增加
线性范围：每次检测 4 至 100 毫克 D - 葡萄糖
检测限：0.036 克 / 100 克
反应时间（分钟）：约 5 小时
应用实例：植物材料、淀粉样品及其他材料。
方法认证：新方法