果聚糖检测试剂盒,K-FRUC
果聚糖广泛分布于植物界。单子叶植物,双子叶植物和绿藻中均存在。
以分子结构和分子重量区别果聚糖。也可以分为三类:菊粉组,果聚糖组和带支链组。菊粉组主要或专门由果糖基果糖键组成。果聚糖组主要或专门由果糖基果糖键组成。带支链组由大量的(2→1)和(2→6)果糖基果糖键共同组成。
目前存在很多测定植物材料和食品中果聚糖的方法。被广泛接受的是水解为D-果糖(和D-葡萄糖)后再测定的方法。这存在将蔗糖,D-果糖和D-葡萄糖分别去除或测定的问题,Pontis(1966)已经报道了蔗糖,D-葡萄糖和D-果糖的去除方法,利用蔗糖酶水解蔗糖,再通过氢氧化钠煮沸破坏随之产生的D-果糖和D-葡萄糖及原有的单糖。据报道,蔗糖酶对菊粉组低聚果糖的作用是缓慢的,可以通过选择正确的孵育时间使其失效。通过测定目前使用的纯化的酵母蔗糖酶,发现很难。
但是,本试剂盒提供的方法操作简单,使用标准实验室设备,并且是精确性,可重复性和专一性都很好。采用的酶是高纯度酶,专一性水解蔗糖,淀粉和果聚糖。采用的蔗糖酶快速水解蔗糖但对1-蔗果三糖和其他果聚糖的水解活性可以忽略不计(McCleary和Blakeney,1999)(图2)。在底物浓度为10 mg/mL时,蔗糖与1-蔗果三糖的相对水解比率为3,800:1。
原理:
蔗糖被一种特定的蔗糖酶水解,这种酶对低聚合度(DP)的FOS(如1-果糖和1,1-酮四糖)没有作用。3淀粉和麦芽糊精被普鲁兰酶和β-淀粉酶水解为麦芽糖和麦芽三糖,然后这些低聚糖被麦芽糖酶水解为D-葡萄糖(1&2)。由于蔗糖酶在30°C下更稳定,因此现在这是该培养步骤的推荐温度。
(蔗糖酶,pH 6.5,30°C)
(1) 蔗糖+H2O ——> D-葡萄糖+D-果糖
(普鲁兰酶、β-淀粉酶、麦芽糖酶,pH 6.5,30°C)
(2) 淀粉+麦芽糖 ——> D-葡萄糖
D-葡萄糖和D-果糖被硼氢化钠还原为相应的糖醇、D-山梨醇和D-甘露醇。在这个反应中,水解菊粉制剂中低聚果糖还原端的D-果糖基残留物也被还原为糖醇。天然果聚糖和非还原性FOS,如Neosugs®,不受此反应的影响(3)。
(硼氢化钠,40°C)
(3) D-葡萄糖+D-果糖 ——> D-山梨醇+D-甘露醇+还原低聚果糖
FOS、果聚糖和硼氢化物还原的FOS被内切和内切菊粉酶和内切果聚糖酶特异性水解为D-葡萄糖和D-果糖(4)。
(外菊粉酶、内切菊粉酶和内切左旋酯酶,pH 4.5,40°C)
(4) 果聚糖+水 ——> D-葡萄糖+D-果糖
使用PAHBAH还原糖法测量来自果聚糖的D-果糖和D-葡萄糖。6这种方法使用简单,D-果糖和D-葡萄糖的颜色响应相同(5)。
(PAHBAH试剂,100°C,6分钟)
(5) D-葡萄糖+D-果糖 ——> PAHBAH显色复合物
套件内容:
用于进行100次检测的试剂盒。包含:
瓶子1。蔗糖酶加β-淀粉酶、普鲁兰酶和麦芽糖酶冻干粉。储存温度低于-10°C。有效期见瓶身。
瓶子2。果糖酶。重组外源和内切菊粉酶和重组内切菊糖-(x2)冻干粉末状的左旋糖苷酶。
储存温度低于-10°C。有效期见瓶身。
瓶子3。菊粉控制面粉。菊粉在α-纤维素存在下冷冻干燥。在室温下储存。有效期见瓶身。
瓶子4。Levan控制面粉。提摩太草在α-纤维素存在下冻干。在室温下储存。有效期见瓶身。
瓶子5。蔗糖控制面粉。蔗糖在α-纤维素存在下冷冻干燥。在室温下储存。有效期见瓶身。
瓶子6。D-果糖标准溶液(1.5 mg/mL)在0.2%(w/v)苯甲酸中的溶液。
在室温下储存。有效期见瓶身。
分析物:果聚糖
检测形式:分光光度计
检测方法:吸光度
波长(nm):410
信号响应:增加
线性范围:每次测定2.3至55µg D-果糖或D-葡萄糖
检测限:0.16g/100g
总检测时间:~90分钟
应用示例:面粉、婴儿配方奶粉、动物饲料、宠物食品、植物材料(如洋葱)、食品和其他材料
方法识别:AACC方法32-32.01、AOAC方法999.03、AOAC法2016.14、AOAC法2018.07和CODEX方法类型III
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