Amersham™ ECL™ Prime蛋白印迹试剂
基本信息
产品名称：
Amersham™ ECL™ Prime蛋白印迹试剂
英文名称：
Amersham™ ECL™ Prime
国产/进口：
进口
产地/品牌：
Cytiva
型号：
Amersham™ ECL
参考报价：
销售商：
总点击数：
59441
更新日期：
2025-05-14
产品类别：
性能参数
Amersham™ ECL™ Prime蛋白印迹试剂
Amersham ECL家族最近加入的成员是ECL prime，它至少具有ECL plus两倍的敏感性，其最低检测限（LOD）可达低皮克量级。该试剂的特点在于大幅增加了信号的稳定性，这使得反复曝光变成可能，并使其能在一个试验中轻松地进行多个印记处理。此外，ECL prime所发射的信号强度提高了3到5倍，这也就 意味着ECL prime也采用比ECL plus低3倍的一抗和二抗进行检测，这不仅降低了背景，并使抗体试剂的费用得到降低。
ECL Prime保留并增强了Amersham ECL plus和Amersham ECL Advance™的优势，提供出一套敏感、稳定、在很宽蛋白动态水平范围内能精确定量并在节省昂贵的抗体试剂成本的检测系统：
●信号强度高且灵敏，允许使用高度稀释的一抗和二抗而不降低灵敏度
●信号稳定，可重复曝光，非常适合大量实验的开展，客户可以从容地安排实验和检测之间的时间最适合于ImageQuant™LAS 4000（CCD成像）成像，也可与Amersham Hyperfilm匹配使用
●可与Rainbow™分子量标准和Amersham ECL Dualvue™蛋 白印记标准配合使用
●最适合选用Amersham Hybond™-P（PVDF）膜，也可使 用Amersham Hybond-ECL（硝酸纤维）膜
应用
蛋白免疫印迹
ECL Prime主要在蛋白免疫印迹流程的检测阶段发挥作用，同时对上游的步骤也有一定的影响。比如，ECL Prime作为检测方法时可以采用高度稀释的一抗作为与免疫印迹膜杂交的探针。这不仅在经济上非常合适，也避免了背景信号下淹埋的与目的蛋白之间的较弱特异结合。ECL的高灵敏度要求其不仅能封闭非蛋白结合位点，并且能被清洗步骤彻底清除。
化学发光蛋白检测
ECL prime可检测出蛋白印记实验中极微量的蛋白质。信号为发射光，其信号强度与检测蛋白量成正比，可以给出单次印记在很宽蛋白水平范围的精确数据。
ECL prime可检测出蛋白印记实验中极微量的蛋白质。信号为发射光，其信号强度与检测蛋白量成正比，可以给出单次印记在很宽蛋白水平范围的精确数据。
性能特点
灵敏度和精确度
与ECL plus相比，ECL prime更加灵敏，且在很宽的蛋白水平范围内呈现线性信号响应。图4结果为加ECL prime 75秒后曝光以及加ECL Plus 3分钟后曝光。结果表明ECL prime在灵敏度方面增加了4倍（见图4的LOD），且线性动态范围有明显的改善，这使得同一印迹膜上无论高或低丰度的蛋白都能在单次曝光后被检测出来并精确定量。
样品： 对2.5 ng转铁蛋白进行2倍梯度稀释
膜： Amersham Hybond-p
封闭： ECL prime封闭剂(ECL prime)和5%脱脂干奶粉(ECL plus)
一抗： 兔抗转铁蛋白(1:3000)
二抗： HRP偶联的抗兔IgG(1:30000)
检测： Amersham ECL prime/ Amersham ECL plus
成像： ImageQuant LAS 4000 mini(其中Amersham ECL prime成像需要75秒， Amersham ECL plus成像需要3分钟)
LOD： 2.4 pg(ECL prime)，9.8 pg(ECL plus)
动态范围(DR)： 3个数量级(ECL prime), 2.4个数量级(ECL plus)
图1 分别用ECL prime（上栏）和ECL Plus（下栏）对2倍梯度稀释的转铁蛋白进行蛋白免疫印迹检测。样品印迹在Amersham Hybond-p（PVDF）膜上，并通过ImageQuant LAS 4000 mini系统进行成像。
信号稳定性
ECL prime产生的化学发光信号非常稳定，即使对于所检测 的最小量的蛋白质，其信号依然能在加入试剂后三小时内维持足够强度，这使得重复曝光成为可能，并且能在每次实验和分析之间轻松地安排时间。
经过ECL prime处理1小时后，大约还剩下60%的信号，而
ECL plus处理则只剩下15%。
ECL plus处理则只剩下15%。
样品： 对2.5 ng转铁蛋白进行2倍梯度稀释
膜： Amersham Hybond-p
封闭： 5%牛血清白蛋白，溶解在PBS-T溶液中
一抗： 兔抗转铁蛋白(1:3000)
二抗： HRP偶联的抗兔IgG(1:30000)
检测： Amersham ECL prime/ Amersham ECL plus
成像： ImageQuant LAS 4000 mini(所有时间点都进行3分钟成像)
图2.加入ECL prime 3小时内各个时间点的信号强度进行并排比较。同时对ECL试剂处理相同时间的效果进行比较。
有效利用抗体
使用ECL prime可以检测到ECL plus检测不到的更低的蛋白量，即使一抗经过高度稀释，这种可能性仍然存在。ECL prime中采用1:10000（一抗）和1:50000（二抗）的抗体稀释与ECL plus采用1:3000和1:30000的抗体稀释所得到的信号强度和LOD类似。
样品： 对10 μg的NIH 3T3细胞裂解总蛋白进行2倍梯度稀释
膜： Amersham Hybond-P
封闭： 5%牛血清白蛋白，溶解在PBS-T溶液中
一抗： 兔抗β-catenin(1:3000到1:10000)
二抗： HRP偶联的抗兔IgG(1:30000到1:50000)
检测： Amersham ECL prime/ Amersham ECL plus
成像： ImageQuant LAS 4000 mini(一抗1:3000或1:5000稀释时需5分钟，一抗1:7000或1:10000稀释时需7分钟)
图3.对ECL prime和ECL plus在NIH 3T3全细胞裂解物来源的2倍梯度 稀释样品，采用不同稀释倍数的兔抗β-catenin和HRP偶联的抗兔IgG进行免疫印迹检测时的效果进行比较。
细胞裂解物中不同靶蛋白水平的相对定量
具有高度灵敏的ECL prime试剂配合具有极宽动态范围的CCD成像仪如ImageQuant LAS 4000 mini，在同一次印记中通过非调节管家蛋白进行标化，可以对目标蛋白进行可信度极高的相对定量。通过检测管家蛋白的表达水平，可以判断每一泳道是否加入了相似量的总细胞裂解物。
样品： 10 μg的NIH 3T3细胞裂解物(IFNa处理/不处理细胞以一定比例混合)或Hela细胞裂解物(茴香霉素处理/不处理细胞以一定比例混合)
总蛋白膜： Amersham Hybond-p
封闭： 5%牛血清白蛋白，溶解在PBS-T溶液中
一抗： 兔抗β-catenin(1:3000)，小鼠抗pSTAT3(1:3000)或小鼠抗肌动蛋白(1:3000)
二抗： HRP偶联的抗兔IgG(1:30000)或HRP偶联的抗小鼠IgG(1:30000)
检测： Amersham ECL prime
成像： ImageQuant LAS 4000 mini(3分钟，β-catenin；1分钟，肌动蛋白)
图4.免疫蛋白印记法检测（A）5种不同NIH 3T3细胞裂解物中 β-catenin和（B）5种不同Hela细胞裂解物中Tyr705磷酸化STAT3（pSTAT3）的表达水平。每个实例都对同一次免疫印迹中目标蛋白以肌动蛋白水平进行标化和相对定量。值得注意的是，虽然β-catenin的水平在印记的视觉检测上非常相似，但通过ECL prime和ImageQuant LAS 4000 mini分析仍能找到之间明显的差异
|
|
产品兼容性
Amersham ECL Prime经过改良，配合Cytiva的蛋白印记套餐产品使用，可发挥出最佳的性能，例如Amersham Hybond-p膜。当然，Amersham ECL prime也能与其他蛋白免疫印迹试验中常用的试剂匹配使用。例如，使用硝酸纤维Amersham Hybond-ECL膜同样能获得不错的效果，此外对于ECL prime使用，不需要特殊推荐某种分子量标准或封闭试剂。
低丰度磷酸化蛋白的检测
STAT3是一种转录活化因子，参与黑色素瘤的发生发展和宿主免疫。通过对细胞添加某种细胞因子如IFNa进行处理可使蛋白上某个特异地酪氨酸残基发生磷酸化活化。对起始量为12.5 μg IFNa处理的Hela细胞总蛋白进行两倍梯度稀释，经过聚丙烯酰胺凝胶分离并印记在AmershamHybond-P膜上。通过特异的抗体和ECL prime对磷酸化的STAT3进行检测。
样品： 对12.5 μg的IFNa处理的Hela细胞裂解物总蛋白进行2倍梯度稀释
膜： Amersham Hybond-P
封闭： 5%牛血清白蛋白，溶解在PBS-T溶液中
一抗： 小鼠抗pSTAT3（Tyr705）（1:3000）
二抗： HRP偶联的抗小鼠IgG（1:30000）
检测： Amersham ECL prime/ Amersham ECL plus
成像： ImageQuant LAS 4000 mini（5分钟）
图5. 使用ECL prime和ECL plus对IFNa处理的Hela细胞中的pSTAT3进行免疫印迹检测。与ECL plus相比，ECL prime能产生更高强度的信号，这使得蛋白检测的质量即灵敏度得到改善。对照条带为6.25 μg非处理细胞总蛋白。
订购信息
|
Product
|
Code NO.
|
|
Amersham ECL Prime Western Blotting Detection Reagents for 1000 cm2 membrane1
|
RPN2232
|
Note：1 Includes Solution A (luminol solution, 50 ml) and Solution B (peroxide solution, 50 ml), sufficient for 1000 cm2 membrane.
相关产品
|
Related products
|
Code no.
|
|
Amersham Hybond-P (20 × 20 cm), 10 sheets
|
RPN2020F
|
|
ECL Prime Blocking Agent, 20 g
|
RPN418
|
|
ECL Human IgG, HRP-Linked Whole Ab (from sheep), 1 ml
|
NA931-1ML
|
|
ECL Rabbit IgG, HRP-Linked Whole Ab (from donkey), 1 ml
|
NA934-1ML
|
|
Full-Range Rainbow Molecular Weight Markers 250 ‑l
|
RPN800E
|
|
ECL DualVue Western Blotting Markers (25 loadings)
|
RP N810
|
|
|
|
|
Imaging systems
|
Code no.
|
|
ImageQuant LAS 4000
|
28-9558-10
|
|
|
|
|
Software and accessories
|
Code no.
|
|
ImageQuant TL 7.0 and IQTL SecurITy 8.0 Software packages (with Getting Started guide)
|
28-9380-94
|
|
ImageQuant TL 7.01and ImageQuant TL SecurITy 8.0 (single user)
|
28-9332-73
|
更多信息，请点击：Amersham™ ECL™Prime蛋白印迹试剂
公司简介
作为全球生命科学领域的领先者，Cytiva（思拓凡）致力于促进与加速全球医疗的发展。Cytiva（思拓凡）年销售额超过33亿美元,，并在全球40多个国家拥有近7000名员工。作为值得信赖的合作伙伴，Cytiva（思拓凡）全面助力客户提升研究与生产流程中的速度、效率与能力，赋能创新型药物的发展和生产，惠及全球患者。
更多信息，敬请访问: www.cytiva.com
更多信息，敬请访问: www.cytiva.com
售后服务
相关视频
暂无
资料下载
暂无
