微生物测试片---菌落总数测试片
1、原理及适用范围
菌落总数是指样品经过处理，在一定条件下培养后所得1mL(g)检样或单位面积样品中所含菌落的总数，是最常用的微生物检测项目。菌落总数测试片（FilmplateTM Aerobic BB202）是一种预先制备好的一次性培养基产品，含有标准的营养培养基，冷水可溶性的吸水凝胶和脱氢酶指示剂氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在测试片上呈红色，这样可缩短计数时间和增强计数效果。本产品适合于各类食品及食品原料中菌落总数的测定，也可用于检测食品加工容器、操作台和其他设备表面的菌落总数。执行标准：食品安全国家标准 食品微生物学检验菌落总数测定（GB/T 4789.2-2010）。
2、操作方法
2.1、样品处理：取样品25mL（g）放入含有225mL灭菌磷酸缓冲液稀释液（或生理盐水）的取样罐或均质杯内，制成1:10的样品匀液，必要时用1mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液调节样品匀液pH至6.6～7.2。用1mL灭菌吸管吸取1:10样品匀液1mL，注入含有9mL稀释液的试管内，振摇后成为1:100的样品匀液，以此类推，做出1:1000等稀释度的样品匀液，每次换一支吸管。
2.2、接种：一般食品选2～3个稀释度进行检测，含菌量少的液体样品（如饮用纯水和矿泉水等）可直接吸取原液进行检测。将菌落总数测试片（BB202）置于平坦实验台面，揭开上层膜，用无菌吸管吸取1mL样品匀液慢慢均匀地滴加到纸片上，然后再将上层膜缓慢盖下，静置10s左右使培养基凝固，每个稀释度接种两片。同时做一片空白阴性对照。
2.3、培养：将测试片叠在一起放回原自封袋中并封口，透明面朝上水平置于恒温培养箱内，堆叠片数不超过12片。一般食品培养温度为36℃±1℃，培养15～24h；水产品培养温度为30℃±1℃，培养48h。
3、结果判读
细菌在测试片上生长后会显示红色斑点，选择菌落数适中（30～300个）的测试片进行计数，乘以稀释倍数后即为每毫升（或每克）样品中所含的细菌菌落总数。
如图：http:///uploadfile/201005/01.jpg
4、计数原则及报告方式
4.1、若只有一个稀释度纸片上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个纸片菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每毫升(或克)样品中菌落总数结果。
4.2、若有两个连续稀释度的纸片菌落数在适宜计数范围内时，按式(1)计算:
http:///uploadfile/201005/02.jpg
式中：
N——样品中菌落数；
∑C——测试片上(含适宜范围菌落数的测试片)菌落数之和；
n1——第一个适宜稀释度测试片数；
n2——第二个适宜稀释度测试片数；
d——稀释因子(第一稀释度)。
示例：
http:///uploadfile/201005/03.jpg
上述数据经“四舍五入”后，表示25000或2.5×104。
4.3、若所有的稀释度菌落总数均大于300CFU，则对稀释度最高的测试片进行计数，其他测试片可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
4.4、若所有的稀释度菌落总数均小于30CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
4.5、若所有的稀释度（包括液体样品原液）均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
4.6、若所有稀释度的平均菌落数均不在30CFU～300CFU之间，其中一部分小于30CFU或大于300CFU，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
4.7、菌落总数的报告
4.7.1、菌落总数在100CFU以内时，按“四舍五入”原则修约，采用两位有效数字报告。
4.7.2、大于或等于100CFU时，第三位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前两位数字，后面的0代替位数，也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
4.7.3、若测试片上一片红色无法计数时，则报告多不可计。
4.7.4、若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。
4.7.5、称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。
5、表面取样方法
加1mL灭菌磷酸缓冲液（或生理盐水）在测试片上，至少静置10S，使培养基凝固；提起上层膜，使中央滤纸部分贴到待测物表面，用手在外侧轻压；然后将上盖膜合上，置培养箱内培养。
6、附加说明
6.1、菌落总数测试片检测结果与传统平板计数琼脂平板法符合率可达80％以上，山东省疾病预防控制中心进行的验证试验表明，24h计数测试片上菌落数为平板菌落数的87％。
6.2、磷酸缓冲液稀释液的配制与灭菌：贮存液：称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中，用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2，用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液：取贮存液1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL，分装于适宜容器中，121℃高压灭菌15分钟，或者放入消毒碗柜中消毒。
6.3、生理盐水的配制与灭菌：取8.5g分析纯氯化钠（NaCl）溶解到1000mL蒸馏水或纯净水中，先煮开后进行分装，取9mL加入到10mL洁净试管中，盖上硅橡胶塞或棉纱塞，放入红外线消毒柜中消毒。
7、保存条件
本产品需存放在4℃～10℃冰箱中，保质期为一年，铝箔袋打开后,未用完的纸片要放回铝箔袋中封好，放到冰箱中，一个月内用完。在高湿度的环境中可能出现冷凝水，最好在拆封前将整包回温至室温。
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公司位于广州高新技术产业开发区广州科学城内，国家级高新技术企业，国内食品安全快速检测行业的开创者。公司拥有独立的技术中心、生产基地和营销中心，专业从事食品安全快速检验产品的研发、生产、销售和技术服务，已通过ISO9001.2008国际质量体系认证。
1993年在国内第一个研制成功蔬菜农药残留速测卡，并成功地推广应用到于卫生、农业、工商和出入境检验检疫等部门，以及食品生产和加工企业、学校和机关集体食堂、宾馆和餐厅酒楼、生鲜超市和农贸批发市场、出口菜场和蔬菜生产基地等单位，得到多个权威部门的质量认证，并且发展成为国家标准方法（GB/T 5009.199－2003），2010年荣获国家科技进步二等奖。
微生物快速检验系列产品已成为公司最有竞争力的系列产品。在北京奥运、上海世博和广州亚运的食品安全保障中起到积极作用，并已列为食品药品监督部门指定采购产品，病原微生物测试片项目获得了科技部科技型中小企业技术创新基金项目的资助，荣获卫生部中华预防医学会科学技术二等奖。
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