PAGE凝胶快速银染试剂盒

PAGE凝胶快速银染试剂盒
货号: G7210
规格: 1L
保存: 室温(15℃-25℃) 干燥保存，复检期12个月。
试剂盒内容： G7210
硝酸银 2g
染色液A 100ml
显色液B 100ml
显色液C 100ml
终止液D 100ml
注：1L 规格指可配制的硝酸银染色液的体积，实际使用次数根据PAGE 胶大小不同而不同。
产品简介:
核酸银染的原理是银离子可与核酸形成稳定的复合物，然后用还原剂如甲醛在碱性环境下使Ag+还原成银
颗粒，可把核酸电泳带染成黑褐色。它主要用于聚凝胶电泳染色。其灵敏度比EB 高200 倍，该产品
整个过程只需要20 分钟，操作简单，灵敏度高，能检测到10ng 以下的DNA 条带。
操作步骤:
一、染色液配制
需要配制的染色液体积根据PAGE 胶的大小而定，一般的mini-PAGE 胶需要20-30mL。配制用的器皿清洗
干净后用去离子水涮洗，染色液须用去离子水配制，现用现配。如果配制的溶液体积不是100mL，可以按比例
改变各成分用量。
1，硝酸银染液：称取0.2g 硝酸银，加入到90ml 去离子水中彻底溶解，加入10ml 溶液A 混匀，现用现配。
2，显色液：分别取溶液B 和溶液C 各10ml 加入80ml 去离子水中混匀，现用现配。
3，终止液：取终止液D 10ml 加去离子水稀释至100ml，现用现配。
二、染色：
1，PAGE 电泳结束后，将PAGE 蛋白胶转移至玻璃平皿或搪瓷盘中，用去离子水漂洗两遍，每次2min。
2，将PAGE 胶转移至硝酸银染液中，使染液没过PAGE 胶，室温染色10min。可置于摇床上缓慢摇晃，使
其染色均匀。
3，弃去染色液，用去离子水快速漂洗三次，每次半分钟。
4，将PAGE 胶转移至显色液中，使显色液没过PAGE 胶，室温摇晃显色至条带清晰可见。
5，可选，将PAGE 胶转移至终止液中，终止显色1min。
6，银染后PAGE 胶可拍照保存或用于后续试验。
注意事项：
1. 银染主要出现在PAGE 胶的表面，使用薄胶（0.5-0.75mm）可以提高灵敏度。
2. 对于考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE 胶，可用甲醇将胶漂洗后，继续进行银染。考染过程中的乙酸会干
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扰银染，因此要确保将PAGE 凝胶中残留的乙酸彻底洗净。
3. 不同蛋白质对银染的反应是不一样的，尤其是碱性蛋白染色效果差。因此，不宜用银染测定不同蛋白
的比例。
4. 染色过程中，缓慢的振荡是必要的，一般选择40-60 rpm.
5. 凝胶表面的裂纹多是由于压力、手印及表面干燥所致，所以全程中都应带手套操作。
6. PAGE 凝胶背景呈均一的黑色多是水中的杂质引起的，所以溶液的配制应使用电导率小于1 μS 的去离
子水。
7. 如果染色后有呈灰尘或烟雾状灰色或棕色的沉淀出现在凝胶表面，可能是在几步漂洗过程中洗得不够
彻底，或是染色过程时温度太低。
8. 较深的银染背景多是中的杂质所致。
9. PAGE 胶中的甘油、尿素、甘氨酸、Triton X-100 和两性电解质这些物质会干扰银染。
10. 室温操作时，温度的波动往往会干扰银染的效果，恒温水浴可以解决这个问题。
11. 凭借戊二醛预处理可以使各种蛋白质的染色提高40 倍。
12. 染色使用的玻璃器皿必须非常干净，用酸浸泡可以满足要求。
13. 银染应尽快照相，随着时间延长，蛋白条带会变浅，而背景会加深。
14. 银染容器最理想的是玻璃平皿，其次是搪瓷盘和密胺塑料盘等。
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